21.2.2.6测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：Intersil C8-3，5um，150mm×4.6mm(内径)或相当者；柱温：40℃；进样量：25μL；流速：0.8mL/min；流动相：甲醇+水，梯度洗脱程序见表21-9。

表21-9梯度洗脱程序

(2)质谱条件

离子源：电喷雾电离源(ESI)；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测MRM；雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压和碰撞能量见表21-10。

表21-10 伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素参考质谱参数

(3)定性测定

每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5%之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1-5规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

(4)定量测定

外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图21-4。

图21-4 被测物标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图