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河豚鱼、鰻鱼中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留测定

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.4.6 测定

  

(1)液相色谱条件

  

色谱柱: BEHC18, 1.7 μm,50 mm×2.1 mm (内径)或相当者:流速: 0.4 mL/min;柱温: 30℃;检测波长: 350 nm;进样量: 10μL; 流动相: A:乙腈,B: 2%甲酸溶液,梯度洗脱条件见表12-23。

  

表12-23 梯度洗脱条件

  

  

(2) 液相色谱测定

  

将混合标准工作溶液分别进样,以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下,土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的参考保留时间1.25 min,1.35 min,1.67 min, 1.77 min。土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准液相色谱图见图12-8。

  

  

图12-8 土霉素、 四环素、金霉素、强力霉素标准物质液相色谱图

  

12.2.4.7 结果 与讨论

  

(1)提取净化条件的优化

  

在本方法研究中,对比了用Oasis HLB单一固相萃取柱净化和Oasis HLB固相萃取柱、羧酸型阳离子交换柱双柱净化的净化效果。实验发现,只用Oasis HLB固相萃取柱净化,在1.25 min、1.64 min均有比较大的干扰峰存在,当土霉素、四环素、金霉素和强力霉素含量小于0.010 mg/kg,对检测结果均有影响,如图12-9所示;而采用Oasis HLB和羧酸型阳离子交换柱双柱净化,从1 min到2 min之间均无干扰峰,见图12-10。因此,本方法在国际AOAC标准AOAC 995.09的基础上,增加了羧酸型阳离子交换柱净化步骤,改进了净化效果,减少了基质干扰,提高了方法的准确度。因此,增加羧酸型阳离子交换柱净化步骤是十分必要的。

  

  

图12-9 Oasis HLB固相萃取柱净化后样品空白图

  

  

图12-10 Oasis HLB和羧酸型双固相萃取柱净化后样品空白图

  

(2) 流动相配比的选择

  

分别使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1, v/v/v) 和梯度洗脱(2%甲酸+乙腈)对土霉素、四环素、金霉素、强力霉素的分离度和灵敏度进行了对比试验。实验发现,这两种流动相对4种四环素族抗生素的分离效果均很好,但检测灵敏度和保留时间存在很大差异,当使用恒配比0.01 mol/L草酸+乙腈+甲醇(7+2+1,v/v/v)作为流动相时,土霉素和四环素检出限为0.01 mg/kg、金霉素和强力霉素检出限为0.020 mg/kg,且检测时间长。而使用(2%甲酸+乙腈)作为流动相梯度洗脱时土霉素、四环素、强力霉素检出限为0.005 mg/kg,金霉素检出限为0.01 mg/kg,灵敏度比恒配比洗脱要高1倍,且检测时间也同时缩短。因此,本方法采用(2%甲酸+乙腈)梯度洗脱作为四环素族抗生素的流动相。

  

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