21.2.3.7分析条件的选择

(1)提取净化条件的选择

1)样品提取液的选择

阿维菌素类易溶于乙酸乙酯、乙腈，许多文献报道选用乙酸乙酯、乙腈作为提取溶剂，考虑到采用乙酸乙酯作提取溶剂时会引入大量的动物组织中的脂溶性杂质，试验表明，采用乙腈提取阿维菌素类，回收率理想，因此本实验选用乙腈作为提取溶剂。

2)净化条件的选择

与禽畜肌肉相比，河豚鱼、鳗鱼及其制品(指烤鳗)中含有大量的脂肪，尤其是鳗鱼，如带入液相色谱中会严重影响色谱的分离并污染质谱的离子源，试验中发现单以中性氧化铝梯形净化后的样品溶液放置在冰箱中过夜，会产生大量的沉淀，因此必须在固相萃取柱净化前增加常规的脱脂处理，由于阿维菌素类药物在正已烷中有一定的溶解度，因此使用的正己烷先以乙腈饱和，降低正己烷脱脂可能造成的损失，试验结果表明这种前处理方式既保证了样品中的杂质去除，又保证了阿维菌素类药物的回收率。

(2)仪器条件的优化

1)质谱条件的优化

阿维菌素的质谱测定文献报道有采用ESI源和APCI源，GB/T20748-2006/73)中是采用APCI源，但实验中发现当质谱的离子源喷雾结构为垂直喷雾结构时(近年来各质谱仪器公司大多采用此类结构，以减少早期直喷式结构带来的易污染缺点)，阿维菌素的ESI谱中常见的加合峰相对强度会降低，转而以分子离子峰为主，考虑到ESI源应用的普遍性，本方法中采用ESI源作为阿维菌素类药物的离子化源。

蠕动泵以10μL/min的流速连续注射0.1mg/L的阿维菌素类标准溶液入ESI电离源中，在负离子检测方式下对四种阿维菌素类类进行一级质谱分析(Q1扫描)，得到分子离子峰，对各准分子离子峰进行二级质谱分析(子离子扫描)，得到碎片离子信息。确定定性用的各离子对。采用MRM模式采集数据，选择驻留时间为200ms，优化各离子对的去簇电压(DP)，碰撞气能量(CE)，聚焦电压(FP)，入口电压(EP)，碰撞池出口电压(CXP)。各监测离子对的质谱参数和保留时间见表21-20。

2)色谱条件的优化

采用梯度洗脱可有效改善色谱峰形，从而提高检测灵敏度。

21.2.3.8线性范围和测定低限

用乙腈配成0μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L和50.0μg/L的混合标准工作液，在选定的色谱和质谱条件下进行测定，以标准工作溶液被测组分峰面积对标准溶工作液被测组分浓度作线性回归曲线。其线性方程、相关系数见表21-19。本方法对阿维菌素类药物残留的测定低限(LOQ)为5.0μg/kg。

表21-19阿维菌素类的定量离子对、线性方程、相关系数

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