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微生物如何接种及安全注意事项

百检检测 / 2020-11-19 13:44

  微生物在自然界中呈混杂状态存在,要获得所需菌种,必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多,但基本原理却是相似的,即将待分离的样品进行一定的稀释,并使微生物的细胞(或孢子)尽量以分散状态存在,然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种,即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。
 

  微生物如何接种?

  接种是微生物技术中最基本的操作之一,接种技术在微生物的分离纯化、生理生化等试验中都非常重要。由于接种的目的不同,所采用的接种方式也不同,接种可分成斜面接种、穿刺接种和三点接种等。选择正确的接种方法,对于微生物的分离、纯化、增殖和鉴别都有重要作用。因接种方法的不同,常常采用不同的接种工具,如接种环、接种针、移液管和涂布棒等。
 

  在接种过程中,必须进行严格的无菌操作无菌操作一般是在无菌室或接种箱内进行,并靠近煤气灯(或酒精灯,一般用酒精喷灯)的火焰操作。有条件的也可在超净工作台上操作。
 

  微生物三点接种法

  三点接种是为了获得单菌落所使用的方法之一,它是在培养皿上接种,即用接种针蘸取少量霉菌孢子,在浇有琼脂培养基的培养皿(俗称平板)上,以等边三角形的三点轻轻点一点,培养后即在此三点上长出菌落。其优点是:同种菌落有三个重复,同时在菌落彼此相接近的边缘常留有一条狭窄的空白地带此处菌丝生长稀疏,较透明,还分化出典型子实体,因此可以直接把培养皿放在低倍镜下观察,便于根据形态特点进行菌种的鉴定。
 

  具体操作如下:

  步骤一,倒平板,将已灭菌的琼脂培养基放在水浴锅上加热熔化,待冷却至45℃(手握不觉太烫为宜)后,用无菌操作法倒平板。
 

  步骤二,标明三点位置,待平板凝固后,在培养皿底部注明菌种、日期等,并以等边三角形的三个顶点标上记号。
 

  步骤三,右手拿接种针,先在火焰上烧红灭菌并在平板培养基的边缘冷却且蘸湿。
 

  步骤四,蘸取孢子,将灭过菌而且蘸湿的接种针伸入菌种管,用针尖蘸取少量霉菌孢子。
 

  步骤五,点接,以垂直法或水平法把接种针上的孢子点到预先标记好的部位,注意切勿刺破培养基。
 

  将培养皿倒置,于28℃恒温条件下培养,48h后观察生长情况。
 

  接种过程中需要注意哪些问题

  (1)接种室应保持清洁,用煤粉酚皂液擦洗台面及墙壁,定期用乳酸或甲醛熏蒸。每次使用前,均应用紫外灯灭菌。定期对接种室作无菌程度的检查。
 

  (2)进入接种室前,应先做好个人卫生工作,在缓冲间内要更换工作鞋帽、工作衣、戴口罩。工作衣、工作鞋、口罩只准在接种室内使用。不准穿到其它地方去,并要定期更换、消毒。
 

  (3)接种的试管、三角并瓶等应做好标记,注明培养基、菌种的名称、日期。移入接种室内的所有物品,均须在缓冲室用70%酒精擦试干净。
 

  (4)接种前,双手用70%酒精或新洁尔消毒,操作过程不离开酒精灯火焰;棉塞不乱放;接种工具使用前后均需火焰灭菌。
 

  (5)恒温培养箱应经常清洁消毒。
 

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