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镇静剂类药残留分析技术——净化方法(二)

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

2)固相萃取( solid phase extraction,SPE)

  

A.巴比妥类

  

巴比妥类药物净化常用的SPE柱有HLB和C18等。

  

Wang等分析动物和水产品可食组织中的巴比妥类等药物,采用HLB净化。提取液溶解在乙酸铵缓冲液-甲醇(9+1,v/v)中上样,依次用乙酸铵缓冲液-甲醇(9+1,v/v)、正已烷、正已烷-乙酸乙酯(95+5,v/v)淋洗,最后用5 mL正已烷-乙酸乙酯(50+50,v/v)洗脱,回收率为79.6%~108%。我国检验检疫行业标准SNT 2217-2008也采用类似条件净化方法。反相SPE净化分别采用水相和低极性有机相淋洗可充分发挥SPE柱的保留机制,净化提取液中的极性和非极性杂质,降低质谱分析的基质效应。

  

Zhao等测定猪组织中3种巴比妥类药物,乙腈提取液浓缩后用5 mL 0.1 mol/L K2HPO4(pH 7.4)溶解,过C18 SPE柱净化,依次用5 mL正已烷和5 mL正已烷-乙酸乙酯(95+5,v/v) 淋洗,正己烷-乙酸乙酯(7+3,v/v)洗脱。LOQ在猪肝中不高于2.20 μg/kg,猪肾中不高于3.35 μg/kg;4种药物回收率为68%~90%。陈建虎等测定血液中巴比妥、异戊巴比妥、速可眠和苯巴比妥,用酸性缓冲液提取后,过C18 SPE柱,再用5mL水清洗,氮气吹干后,用2 mL三氯甲烷以0.5 mL/min流速洗脱,LOD为0.04~0.10μg/mL,回收率为80.3%~92.6%。戴晓欣等14测定水产品中苯巴比妥,C18 柱依次用6 mL水和6 mL体积分数为10%的乙腈溶液淋洗,用8 mL二氯甲烷洗脱,回收率在80.49%~ 102.42%之间,RSD 为1.52%~ 10.15%,LOD为10 μg/kg,LOQ为30 μg/kg。

  

B.苯二氮卓类

  

苯二氮卓类药物的SPE净化柱主要包括C18、HLB、Phenyl 柱等。

  

汪丽萍等分析猪肉中的苯二氮卓类镇静剂,提取物用K2HPO4溶解后,过C18固相萃取柱,依次用5 mL蒸馏水和10 mL正己烷淋洗,用正已烷-丙酮(5+5,v/v) 洗脱。艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑的回收率为60%~115%,RSD为3.8%~9.7%,LOD为10 μg/kg。Wang 等用类似C18填料特性的多壁碳纳米管净化猪肉中的地西泮、艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑。研究发现多壁碳纳米管填料对上述药物吸附选择性比C18更高,效果更好,4种药物回收率为75%~104%,CV为1.3%~ 10%,地西泮LOD为2 ug/kg,艾司唑仑、阿普唑仑和三唑仑LOD为5 μg/kg。钱晓东等建立了LC-MS MS测定鱼类样品中地西泮及其代谢物分析方法。样品用1%氨化乙酸乙酯提取,HLB净化,用10mL水-乙腈(9+1,v/v)上样,待样液全部流出后,用5 mL水淋洗,抽干,10mL乙酸乙酯洗脱。方法LOQ均为1 μg/kg,回收率为82.1%~119.0%, RSD为2.2%~15.0%。于慧娟等检测水产品中地西泮及其代谢物去甲地西泮、替马西泮和奥沙西泮,残留物用乙腈-水溶解,过HLB SPE柱净化,分别用5 mL 5%甲醇-水和5mL水淋洗,再用10 mL乙酸乙酯洗脱。待测药物的平均回收率为82.1%~ 119.0%。

  

Borrey等用Bond Elute Phenyl柱提取净化尿中的15种苯二氮卓类药物。尿液经酶水解后溶解于PBS上样,依次用水、乙腈-水(7+3,v/v)淋洗,用甲醇洗脱,吡啶-乙酸酐衍生化后,进行GC-MS测定,各类药物提取率达80%以上,LOD 为1.0~1.7ng/mL。

  

Lee等测定毛发中的苯二氮卓类药物,甲醇提取液蒸干后用磷酸盐缓冲液(pH6)复溶,上CLEAN SCREEN小柱净化,依次用水、0.1 mol/L盐酸溶液、正已烷淋洗,用二氯甲烷-异丙醇-氨水(78+20+2,v/v) 洗脱,GC-MS测定。CLEAN SCREEN以硅胶为基质的共聚物为填料,硅胶表面聚合有独特的疏水和季胺离子交换官能团,类似于阳离子交换萃取。地西泮、劳拉西泮、去甲地西泮、奥西泮、替马西泮的LOD为5μg/g,咪达唑仑和唑吡坦的LOD为10μg/g;LOQ为10~20μg/g,回收率71%~103%。

  

C.吩噻嗪类

  

吩噻嗪类药物SPE净化常用的填料有MCX、硅藻土、HLB、C18和碱性氧化铝等。

  

Cheng等用MCXSPE柱净化猪组织中氯丙嗪、异丙嗪、地西泮和甲喹酮残留。样品溶解在0.1mol/L hCl-乙腈(2+98,v/v)中上样,依次用3mL 0.1mol/L hCl和2mL甲醇淋洗,用2mL氨水-甲醇(2+98,v/v)洗脱。GC-MS测定,回收率为87.6%-106.8%。研究还发现,用HLB净化,氯丙嗪回收率过低;用C18小柱净化,氯丙嗪和异丙嗪回收率过低;最后选择MCX小柱。

  

Holland等将肾脏中赛拉嗪及其代谢物(2,6-二甲基苯胺)的氯仿提取液直接用硅藻土SPE净化。牛肾中塞拉嗪平均回收率为78.3%,CV为9.51%;2,6-二甲基苯胺回收率为87.2%,CV为9.61%;猪肾中赛拉嗪回收率为80.8%,CV为7.33%;2,6-二甲基苯胺回收率为86.7%,CV为7.10%。

  

李春风等建立了水产品中包括氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪、异丙嗪、甲苯噻嗪等5种吩噻嗪类药物的残留分析方法。用HLB柱净化,依次用水和10mmol/L硫酸进行淋洗,用乙腈洗脱。LOQ为0.5ng/g,总体平均回收率为75.7%~87.7%,RSD为9.0%~15.2%。

  

路平等测定猪肝中的氯丙嗪,用C18柱对其进行净化处理。用2mL乙腈活化,上样后用2mL水淋洗,氨化乙酸乙酯洗脱,洗脱液氮气吹干后,用乙酸乙酯进行复溶,测定。组织中平均回收率为76.4%~118.6%,CV为2.2%~19.9%,LOQ为0.5~2.0μg/kg。

  

洪月玲等用乙腈提取猪肉及虾肉中氯丙嗪后,提取液蒸干残留物用2mL甲醇溶解,过碱性氧化铝柱萃取净化,收集流出液直接测定,LOD为4ug/kg,回收率为80%~101%。

  

D.丁酰苯类

  

丁酰苯类药物属碱性,常用离子交换柱净化。

  

Adam等测定猪肝脏中的阿扎哌酮和阿扎哌醇,乙腈提取液用氯化钠缓冲液稀释,过BondElut Certify阳离子交换SPE柱净化,依次用0.1%乙酸、甲醇淋洗,用2%氨水-乙酸乙酯洗脱。方法LOD为10μg/kg,回收率分别为88.2%和91.2%。Cerkvenik-Flajs等测定猪肾中阿扎哌隆和阿扎哌醇,乙腈提取液加乙酸酸化,上MCX固相萃取柱净化,分别用水和甲醇淋洗,用三乙胺-甲醇(5+95,v/v)洗脱。方法回收率分别为88.2%和91.2%;阿扎哌隆和阿扎哌醇的CCa分别为1.1ug/kg、1.2ug/kg;LOQ分别为5μg/kg、10μg/kg。

  

E.多种类

  

朱坚等在分析猪肉中地西泮和氯丙嗪的残留时,乙腈提取液中加入20%氯化钠水溶液,用0.01mol/L硫酸调节pH4.8~5.0,过HLB净化,用15mL酸性乙腈洗脱。猪肾中地西泮的平均回收率为76.7%~93.4%,氯丙嗪的平均回收率为99.4%~101.6%;猪肉中地西泮的平均回收率为80.1%~85.2%,氯丙嗪的平均回收率为95.5%~96.4%。Delahaut等测定猪肌肉和肾脏中吩噻嗪类(氯丙嗪、乙酰丙嗪、丙酰丙嗪)、丁酰苯类(阿扎哌隆和阿扎哌醇)残留。乙腈提取液用10%氯化钠溶液稀释后,过HLB柱,用0.01mol/L硫酸溶液淋洗后,用2mL乙腈洗脱净化。方法回收率均大于83.3%。

  

Zhang等用氨基柱净化,建立了动物组织中包括11种镇静剂(苯巴比妥、艾司唑仑、咪达唑仑、地西泮、硝西泮、癸氟奋乃静、氯丙嗪、乙酰丙嗪、氟哌啶醇、塞拉嗪、阿扎哌醇)在内的30种药物的残留分析方法。猪、牛肾脏、肝脏和肌肉的乙腈提取液吹干后溶解于0.5mL甲醇中,上氨基柱净化,不经淋洗,直接用5mL甲醇-丙酮(1+1,v/v)和5mL丙酮洗脱。猪肌肉、肾脏、肝脏中11种镇静药物回收率在76.4%~118.6%之间,CV为2.2%~19.9%,LOQ为0.5~2.0μg/kg。通过比较C18、HLB和氨基柱的净化效果,表明氨基柱更适宜。用C18、HLB净化,氯丙嗪、氟吩噻嗪、地西泮回收率均低于10%。

  

Schuh等描述了一种动物性食品(如肉类和内脏)中8种兽用镇静剂(包括氟哌啶醇、氯丙嗪和甲苯噻嗪等)的分析方法。采用乙腈提取,正已烷脱脂,用MCXSPE柱(6mL,500mg)净化,最后用正己烷在碱性条件下萃取,萃取液再用LC-MS/MS分析。该方法被用来测定牛和猪肝脏加标样品中镇静剂残留,LOD为0.1~0.5μg/kg,CCβ优于欧盟基准实验室建议的10~ 50 μg/kg的检测水平。