(6)酶联免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assays， ELISA)

免疫分析技术作为筛选方法具有前处理相对简单，分析速度较快的特点，受到广泛的关注，而ELISA技术是残留分析中最为常用的免疫分析方法。

王自良选择苯巴比安苯环对位作为偶联位点，引入活性氨基作为间隔臂，经硝化和还原两步化学反应合成半抗原-对氨基苯巴比妥，并用重氮化法偶联于蛋白，合成免疫原，免疫新西兰白兔获得多克隆抗体。测试ELISA效价为1：6.4×105，阻断ELISA测定的IC50为14.8μg/L，与巴比妥交叉反应率为5.2%。建立ELISA方法的灵敏度为0.88 μg/L， LOD为1.0 μg/L，检测猪尿样添加回收率为95.53%，平均批内和批间CV均小于15%；与其他化合物无交叉反应，不同生物基质对检测结果影响不大。

李秋生用混合酸酐法与活化的牛血清白蛋白(BSA)偶联，合成了免疫原和包被抗原。用免疫原免疫小鼠，制备了硝西泮的单克隆抗体，与结构类似物氯硝西泮、地西泮及其代谢物7-氨基硝西泮、7-氨基氯硝西泮都具有较高交叉反应，而与其他镇静剂交叉反应率很低。以此建立的间接ELISA方法，检测尿液的回收率在62.8%～85.6%之间。王亚宾用地西泮与羟甲基羟胺偶联作半抗原，采用混合酸酐法制得免疫原，并通过免疫获得抗体。建立间接ELISA的IC50为0.145 ng/mL，在动物源食品中的LOD为0.1 ng/mL，与其他结构或功能相似的药物交叉率很小，检测食品中安定药物的回收率为68%～92%，CV小于20%。

刘伟等采用混合酸酐法制备出氯丙嗪抗原，免疫小鼠，获取的氯丙嗪单克隆抗体，建立间接竞争ELISA的IC50 为0.73 ng/mL。并以此建立了鸡肝和猪肝中氯丙嗪的ELISA测定方法。方法回收率分别为88%～95%和86%～95%。刘建静188合成了氯丙嗪人工免疫原，免疫后获得兔抗氯丙嗪抗血清。以此建立ELISA方法检测牛奶中氯丙嗪残留，LOD为4.5 ng/mL，添加回收率在65%～114.6%之间。孙文佳等还将ELISA 法与化学发光法结合，建立了氯丙嗪的间接竞争化学发光酶免疫检测方法，其IC50为0.12 μg/L， LOD为0.02 μg/L。

Cooper等制备了阿扎哌醇、丙酰丙嗪和卡拉洛尔的多克隆抗体。阿扎哌醇抗体与阿扎哌隆交叉反应率28%，丙酰丙嗪抗体与氯丙嗪、乙酰丙嗪交叉反应率为24.9%和11.7%。用三种抗体建立了同时测定动物肾脏中阿扎哌醇、阿扎哌隆、丙酰丙嗪、氯丙嗪、乙酰丙嗪和卡拉洛尔等6种药物的ELISA检测方法，LOD 分别为5μg/kg、15μg/kg、5μg/kg、 20 μg/kg、5 ug/kg、5 ug/kg。

(7)传感器技术(sensor)

传感器技术发展迅速，在镇静剂分析中，按照识别机制主要有分子印迹传感器和免疫传感器。

1)分子印迹传感器

分子印迹传感器将分子印迹的选择性与传感器的灵敏度结合起来，可以制成高选择性、高灵敏度和长寿命的检测工具。一般将MIP作为识别元件固定在传感器界面，分析物与MIP的键合作用经传感器转化为电信号并放大，而得以检测。刘晓芳等9在一次性丝网印刷电极上原位制备地西泮的分子印迹膜，与便携式电导仪相连接，组装成检测地西泮的电导型传感器，并测试了肉样品中地西泮的含量。该传感器对地西泮具有很高的灵敏度和特异性，LOD为0.008mg/L，线性范围为0.039～1.25 mg/L，基于肉品的检测回收率为91.3%～95.0%，可用于现场快速检测。

2)免疫传感器

免疫传感器是将免疫测定法与传感器技术相结合而构建的一类新型生物传感器。将抗原或抗体固定在传感器基体.上，通过传感技术使抗原抗体反应时产生的物理、化学、电学或光学上的变化，转变成可检测的信号来测定待测分子的浓度。Salmain 等研制出免疫传感器用于苯巴比妥残留检测，并与HPLC、ELISA 进行了对比。方法回收率为100%～110%，CV 为6%～10%，与HPLC结果相关性为0.95。与ELISA方法比较，样品预处理更简单，检测结果更准确。