(3)薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC)

TLC是一种设备简单、操作方便、分离速度快、灵敏度及分辨率较高的色谱分析方法。张启华等报道了蜂蜜中TCs残留量的薄层色谱测定法。残留在蜂蜜中的TCs在经Sep-Pak C18小柱固相萃取处理后，用高效正相硅胶TLC分离，展开剂为：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-乙腈-5.0mol/L氨水(3+1+3+0.5+1，v/v)，待展开距离达到75mm时取出。展开剂挥发后，先后喷上0.20mol/L的氯化镁溶液和100g/L的三乙醇胺-乙醇溶液，晾干后用紫外灯在365nm下观察荧光点。对阳性样品利用薄层扫描仪在狭缝2×2、测定波长280nm、参比波长320nm的条件下进行反射吸收测定。根据标样中DC、OTC、TC的Rf值与样点中抗生素的Rf值来定性，利用外标法进行定量。在蜂蜜中的添加量为0.05ng、0.10ng、0.20ng时，DC、OTC和TC的回收率分别为91.6%～100.3%、84.5%～103.1%和77.0%～103.2%，DC、OTC、TC的LOD分别为：7.09ng、5.49ng和6.11ng。Weng等开发了采用TLC测定饲料中TC、CTC和OTC的方法。硅胶层先用10% Na-EDTA(pH8～9)喷涂，在二氯甲烷-甲醇-水中展开后，浸渍在液体石蜡-己烷(30+70，v/v)中，在荧光密度400nm下检测。方法LOQ为TC和CTC杂质的0.2%，OTC杂质的0.1%。Meisen等报道了采用高效薄层色谱(HPTLC)-紫外光谱(UV)和红外线基质辅助激光解吸/电离正交飞行时间质谱(IR-MALDI-o-TOF-MS)测定4种TCs的方法。分析物在正相硅胶和水可湿润的混合C18反相层展开分离后，UV测定，分离的、明确标识的TCs谱带再用MS分析。定量范围在20ng～1ug之间，LOD为5ng。

(4)流动注射法(flow-injectionanalysis，FIA)

FIA是一种可摆脱溶液化学分析平衡理论的束缚，在非热力平衡条件下对处于液流中能够重现处理样品和试剂带区的定量流动分析技术，具有精度高、分析速度快以及易于实现自动化等特点。

王皓等采用FIA-化学发光法(chemiluminescence，CL)法测定血样和尿样中的DC。在0.8mol/L的HNO3酸性介质中，DC与0.5mmol/L的Ce(IV)反应，产生化学发光，采用10umol/L的罗丹明6G增敏，蠕动泵的转速为30r/min，利用FIA技术建立了简易、快速测定DC的化学发光法。化学发光强度在1.0×10-8～1.0×10-6 g/mL范围内与DC的浓度呈现良好的线性关系；LOD为2×10-9 g/mL；测定血样和尿样中的DC回收率为97%～117.4%，CV低于4.5%。Rodriguez等采用FIA-分光光度法检测牛奶中CTC、TC和OTC残留。牛奶样品直接经MSPE净化，酸化甲醇洗脱，FIA分离，紫外可见分光光度计在540nm处检测。该方法的线性范围为0.03～0.60mg/L，LOD为10μg/L，平均回收率为91.0%～97.0%，CV低于5%。经MSPE-HPLC和SPE-HPLC方法验证，差异不显著。

(5)毛细管电泳法(capillary electrophoresis，CE)

CE具有操作简单、色谱柱不受样品污染、分析速度快、分离效率高、样品用量少、运行成本低等优点。

陈天豹等用CE对蜂蜜中的TC、OTC、DC和CTC进行了分离测定。毛细管为50umi.d.×57cm(有效长度50cm)，毛细管在每次使用前先用0.1mol/L的NaOH在高压(138kPa)下清洗5min，后用水洗5min，再用电泳缓冲液洗2min。TCs的等电点(pI)在4～6，在pH2～8范围内较稳定。磷酸氢二钠-柠檬酸的pH缓冲范围为2.6～7.6，且磷酸盐和柠檬酸在短波长下光吸收低，不会增加基线噪音，降低了可检测浓度，随pH的降低，毛细管表面的负电荷减少，电渗流减弱，实验结果显示出峰时间相应延长，pH3.2时分离效果较佳。电泳缓冲液中添加一种或几种有机试剂，对样品的溶解性、电渗流大小和分辨率等都有较大的影响。TCs在磷酸氢二钠_柠檬酸电泳缓冲液中溶解性较差，因此需在电泳缓冲液中添加一定量的乙腈以解决溶解性差的问题，方法采用的缓冲液为0.02mol/L磷酸氢二钠-0.01mol/L柠檬酸缓冲液(pH3.2，含体积分数为12%的乙腈)。蜂蜜样品经水稀释后1000r/min离心5min，CE-UVD检测，检测波长为270nm。TC、OTC和DC的LOD为20ug/L，CTC为40μg/L，回收率大于89.6%，CV为0.5%～3.4%。Casado-Terrones等用毛细管区带电泳(CZE)分离检测蜂蜜中的8种TCs以150mmol/L硼酸钠(pH9.8)-2.5%异丙醇作背景缓冲溶液，目标抗生素在16min内全部出峰，LOD为23.9～49.3mg/kg，蜂蜜的加标回收率为55%～89%。

Kowalski采用带有泡状检测池的CE在6min内对鱼肉样品中的TC、OTC和DC进行了检测。

方法使用石英毛细管柱(57cm×75umi.d.)，3.45kPa压力进样5s，分离电压为20kV，分离温度为22℃，UVD在270～280nm检测。TC、OTC和DC的回收率分别为84.0%、80.6%和89.2%，CV低于6.2%，LOD为1.3～1.8ng/g，LOQ为4.3～5.9ng/g。Miranda等开发了测定鸡肉中TC、OTC和DC的CZE-UVD分析方法。样品经C18 SPE和AmberliteXAD7离子交换树脂净化后，进CE分析。

分离缓冲液含有30mmol/L磷酸钠、2mmol/L Na2EDTA和2.5% 2-丙醇(pH12)，分离电压14kV，动态注入5s，360nm测定。整个分析时间小于12min。方法回收率为85%～95%，RSD小于5%；C18 SPE净化方法的LOD为61～68μgkg，AmberliteXAD7净化方法的LOD为81～89μg/kg。

Nozal等报道了采用CE测定水样中TC、OTC和DC的方法。样品采用STRATA-X小柱富集净化，经流歧管与CE在线分析。方法分析范围在7～45g/L之间，LOD为2g/L；回收率为9%～106%，RSD小于7.5%。

Mu等建立了牛奶中TC、OTC和DC残留的CE分析法。样品经MSPD净化，CE分析，电泳缓冲液为30mmol/L Na2HPO4和1mmol/LEDTA-Mellvaine缓冲液(pH11.5)，石英毛细管柱(50cm×75um i.d，有效长度40.5cm)分离，30mbar压力进样3s，分离电压为25kV，分离温度为25℃，UVD在268nm检测。方法的平均回收率为93.4%～102%，LOD为0.0745～0.0808μg/mL。Santos等报道了采用CE分析牛奶中TC等抗生素的残留分析方法。样品经沉淀蛋白后，用C18SPE柱净化，CE测定。毛细管柱为熔融硅胶柱(58.5cm×75umi.d.)，分离缓冲液为2.7×10-2 mol/L KH2PO4和4.3×10-2 mol/L Na2B4O7缓冲液(pH8)，分离电压为18kV，0.5psi静态注入3s，分离温度为25℃，UVD在210nm测定。在添加浓度2.5～5μg/mL，回收率超过72%，RSD小于5%。Wang等以场强样品堆积-电迁移注射在线富集，毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)检测牛奶中的TCs。35mmol/L三羟甲基氨基甲烷-1.1%甲酸-5%甲醇-15%乙腈作为分离缓冲溶液，方法LOD为7.14～14.90ng/mL。研究表明，与未在线富集方法相比，场放大进样检测灵敏度提高6～7倍；将毛细管检测部分折成“Z”字形，加热吹成泡状是增加检测灵敏度的有效措施。