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最全的原料奶嗜冷菌快速检测方法汇总

百检检测 / 2020-12-02 14:03

  原料奶营养丰富,是人类理想的营养食品,但同时也是微生物的良好培养基,属高危险性的食品原料,在众多微生物污染中,嗜冷菌污染是影响原料奶保质期的主要因素。
 

  上世纪90年代,对微生物快速、自动化检测的研究进入了蓬勃发展的阶段,那些基于微生物学、化学、生物化学,生物技术、免疫学技术、血清学技术的快速的、自动化的分析方法均可应用于对食品中的微生物的分离、前期检测、特性研究及计数上。这其中大多数方法都适用于对奶制品的检测。
 

  国外对嗜冷菌检测的标准方法很多,这些方法也在不断地改进,检测的时间也不断地缩短。以国际乳品联合会的检测标准(IDF标准)为例,IDF Standard101A中嗜冷菌数的检测方法为:在6.5℃条件下培养10d,计数;IDF Standard 132A中嗜冷菌数的检测方法为:在21℃条件下培养25h,计数。这些标准方法的检测时间很长,达不到工厂快速检测的要求。
 

  直接荧光过滤法

  DEFT方法是对样品中的活细胞进行计数的一种检测方法。将样品过滤,样品中的微生物就被留在过滤器里。用吖啶橙着染后置于紫外显微镜下进行观察。“存活”的细胞被染成橘红色,橘黄色或橘灰色,而“死亡”的细胞则被染成绿色的荧光。最后通过仪器对玻片上的细菌进行计数。
 

  DEFT方法的缺点在于,对于测定样品中含量很少的细菌,需要预先进行预培养以增加样品中目标微生物的数量,这样在检测时,结果的精确度才高。而这个预培养的时间一般是很长的(24~48h或更长),而且在实践中,样品中的细菌量要在103~105个/ml时才会有很好的线性关系存在。再者这个方法需要仪器较昂贵。这些都是这个方法在工业应用上需要解决的问题。
 

  电阻抗方法

  电阻抗方法是通过测量微生物代谢引起的培养基电特性变化来测定样品微生物含量的一种快速检测方法。微生物在培养过程中,生理代谢作用使培养基中的电惰性物质激活。随着微生物增长,培养基中电活性分子和离子逐渐取代了电惰性分子,使导电性增强,电阻抗降低。研究表明,电导率随时间的变化曲线与微生物生长曲线非常相似。当微生物的起始数量不同时,出现指数增长期的时间也不同,通过建立二者之间的关系,就能通过检测培养基电特性变化推演出微生物的原始菌量。
 

  这个方法的缺点在于,对于现代工业有大量待测原料奶样品的现状来说,10~21h的检测时间还是很长,限制了电阻抗法在工业上的推广利用。
 

  PCR-ELISA法

  自从发明了聚合酶链式反应扩增技术(PCR技术),科研人员开发了一系列基于PCR技术来快速测定食品中致病微生物的新方法,如检测牡蛎中的弧菌、软质奶酪中的利斯特菌、原料乳中的梭菌等。这种检测方法操作简单、具有高灵敏度和高特异性,是快速检测食品微生物的一个重要方法。
 

  流动血细胞法

  流动血细胞法是一个具有潜在应用价值的微生物分析方法,它可以通过各种参数对目标微生物进行一个快速的分析,而且分析量很大。这个方法是将样品中所有的细菌都进行计数而不像标准平板计数法只对那些可以生长在培养基上的活细胞进行计数。因此,在检测牛奶的微生物质量方面,流动血细胞法所得的结果更具有代表性。
 

  酶联免疫吸附技术

  ELISA方法是基于酶反应的一种高特异性和高灵敏性的检测方法,它可以从复杂的样品体系中特异的与目标反应物结合,从而达到检出的目的。
 

  氨肽酶法

  由于革兰氏阴性嗜冷菌是冷藏原料奶中嗜冷菌主要的微生物类群,假单胞菌(Pseudomonas spp.)占其中的绝大部分[33]。氨肽酶法就是利用革兰氏阴性嗜冷菌细胞壁的氨肽酶活性进行检测的。这种氨肽酶可以与特定的底物反应,即使细胞是完整的,反应也会进行。大多数革兰氏阴性细菌细胞壁都具有这种酶,而且活性很高。在相同的条件下革兰氏阳性细菌却不能裂解底物或只表现出很弱的裂解活性。