2.3.2.7 分析条件的选择

(1)样品前处理方法的优化

蜂蜜是一种富含大量糖类，色素和其他物质的复杂基质。因此在LC-Q-TOF/MS检测前，萃取，净化和浓缩等步骤必不可少。而由于蜂蜜是一种过饱和的糖溶液，因此样品的稀释和溶解对前处理方法尤为重要。0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲盐溶液是一个较为理想的选择，这是由于其可以避免大环内酯类和四环素类药物与金属离子结合，从而提高前处理方法的回收率。Na2EDTA-Mcllvaine缓冲盐溶液被广泛用于四环素和喹诺酮类药物的萃取过程中。实验对Na2EDTA-Mcllvaine缓冲盐溶液的pH进行了探讨，结果发现在pH=4时取得了最优的结果，平均回收率为86.4%。

此外，乙腈由于具有共提物低和蛋白沉降作用好的等特点，被广泛应用于QuEChERs方法中，此外酸性条件下的乙腈可以进-步改善萃取的效率。实验对0%～5%醋酸乙腈溶液进行了考察，结果表明5%酸乙腈溶液取得了最好的回收率结果，特别是对于喹诺酮类和四环素类兽药。如图22-36所示，随着酸度的提高，回收率也呈增加的趋势。例如，四环素的回收率从39.7%增加到79.5%，依诺沙星的回收率从51.7%增加到72.1%。

图22-36 酸度对回收率结果的影响(n=3，Mean±SD)

对于目标化合物在水相和有机相之间的分配，QuEChERS方法主要通过盐析过程来实现。在农药残留检测中，MgSO4被用于吸附样品中大量的水。然而，实验结果表明MgSO4会显著降低喹诺酮类，四环素类和大环内酯类善药的回收率。如图22-37所示，四环素类，喹诺酮类和大环内酯类兽药的回收率分别降低了24.8%、7.9%和10.6%。因此，相比而言，Na2SO4是一个更好选择。

在QuEChERS方法中，石墨化碳用于去除色素类共提物，PSA、氨丙基(NH2)常用于吸附极性有机酸、糖类等，而C18用于去除肉类和鱼等基质中的脂类等非极性共提物。对于蜂蜜基质，其含有较高浓度的糖，有机酸等干扰物质，因此，PSA、NH2更为适合作为本研究的吸附剂，通过添加回收率实验发现，采用NH2吸附剂的回收率效果较好。特别是对于四环素类兽药，其回收率结果明显高于PSA吸附剂，见图22-38。因此，最终确定吸附剂为NH2。

图22-37 MgSO4和Na2SO4对回收率结果的影响

图22-38 NH2和PSA对回收率结果的影响(n=3，Mean±SD)

此外，实验还进一步考察了吸附剂用量对回收率结果的影响，实验在100～400mg条件下进行了考察。如图22-39所示，在吸附剂用量为200mg时达到了最好的回收率结果，之后随着吸附剂用量的增加，回收率呈现降低的趋势。

图22-39 不同吸附剂用量对回收率的影响

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