22.3.2.5 样品前处理

(1)试样制备与保存

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做.上标记。将试样于常温下保存。

(2)样品提取和净化

称取1.0g(精确至0.01g)蜂蜜样品，加入6mL Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH=4)稀释涡旋混匀，之后加入18mL 5%醋酸乙腈提取液涡旋混匀30s，2.0g NaCl和4.0g Na2SO4加入离心管中摇匀，振荡提取2min，10℃ 10000r/min(10397g)下离心5min，将9mL.上清液移入15mL具塞离心管中(内含200mgNH2吸附剂)，振荡2min，相同条件下离心5min，转移4.5mL.上清液至10mL玻璃管中，在40℃水浴条件下，氮吹浓缩至干，加入1mL 0.1%甲酸水：乙腈(9：1，v/v)的定容液，涡旋混匀30s后，由0.22μm尼龙滤膜过滤，LC-Q-TOFMS进行测定。

22.3.2.6测定

(1)液相色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱(2.1mm×100mm，3.5um)，流动相A为0.1%甲酸水(含5mmol/L乙酸铵)，流动相B为乙腈；梯度洗脱，程序见表22-8；流速为0.3mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL。

表22-8 梯度洗脱程序表

表22-9 40种兽药保留时间、元素组成、碰撞能量和产物离子信息

(2)质谱条件

电喷雾电离正离子模式(ESI)；毛细管电压：4000V；脱溶剂气温度：225℃，脱溶剂气流量14L/min；鞘气温度：325℃，鞘流气流速11L/min；雾化气压力40psi；锥孔电压和碎裂电压分别为65V和400V；参比离子为m/z 121.0509和m/z 922.0098，用于正离子模式下的实时校正。数据采集采用棒状图数据采集模式，扫描范围为50～1700m/z，扫描速率为4spectra/s。产物离子数据在Target MS/MS模式下设置固定的保留时间，母离子，碰撞能量等信息进行采集，具体参数见表22-9。采集与处理通过Agilent MassHunter Workstation Software(version B.04.00)，包括数据采集，定性分析和定量分析软件。