动物源食品基质复杂，含有蛋白质、脂肪、糖类等多种成分，加之残留的兽药含量甚微、极性差别大，成为兽药多残留高通量分析的难点。传统的兽药检测方法以液相色谱结合紫外和荧光检测器为主，只能满足单一或-类兽药的检测，缺乏一定的通用性和准确性。因此，高通量样品前处理方法和测定方法的开发和应用成为当前研究的热点。

样品前处理是样品分析过程中耗时最长、劳动强度最大，同时也是产生误差最多的一个环节，是实现兽药残留高通量快速检测必须要突破的瓶颈之一。目前报道的多类别兽药残留前处理方法，主要有固相萃取(solid phase extraction，SPE)、分散固相萃取(dispersed solid phase extraction，DSPE)、基质固相分散技术(matrix solid-phase dispersion，MSPD)、加速溶剂萃取(accelerated solvent extraetion，ASE)、免疫亲和色谱(immunoffinity chromatography，IAC)、在线自动净化(automate onlinecleanup)等。而一次分析完成多类别、多组分兽药的高通量检测，是随着液质联用技术(LC-MS)的发展，特别是高分辨质谱(HRMS)的应用得以实现。LC-MS技术主要包括三重四极杆质谱，离子肼质谱，以及Orbitrap，飞行时间质谱和四极杆串联飞行质谱等高分辨质谱。在这些检测方法中，LC-MS/MS在灵敏度和选择性上的优势，以及其在多反应监控(MRM)下的抗干扰能力，使得其成为农兽药多残留检测中的重要工具，但LC-MS/MS作为低分辨质谱只能提供4～5个定性点，较少的定性点会对化合物的定性造成潜在误差。高分辨质谱则弥补了低分辨质谱在定性能力上的缺陷，适合于大量目标化合物的筛查。Alllons模式基于精确质量数，保留时间，母离子和子离子的共流出轮廓匹配来对目标化合物进行定性。并且其优点在于无需设置母离子，保证了数据的可追溯能力。此外，样品也无需重复测定，从而大大提高了检测效率，节省了时间和成本。

本章概述了多类别兽药残留分析常用前处理技术和液相色谱-质谱联用测定技术，简述了兽药精确质量数据库的建立与碎裂机理研究，并列举了作者团队建立的SPE和改良QuEChERS技术结合液相色谱-质谱联用技术，测定肉类、蜂蜜、奶粉中40～100种兽药多残留的高通量方法。

22.1.1 前处理方法

(1)固相萃取(solid phase extraction，SPE)

固相萃取的原理是通过选择性的吸附，从而对样品进行富集、分离和纯化，可近似的认为是一种简单的色谱分离，如图22-1所示。自1978年商品化SPE产品问世以来，这项技术已经得到了迅速的发展。SPE吸附剂主要分为三大类：无机氧化物、通用性吸附剂和专属性吸附剂。

该技术广泛用于兽药检测中，如牛奶中磺胺、喹诺酮和苯并咪唑类兽药，鱼虾中孔雀石绿等兽药，蜂蜜中喹诺酮类兽药。Li等采用HLB柱结合LC-MS检测技术对虾中18种兽药残留(包括四环素、磺胺、喹诺酮等)进行了测定，在添加和污染样品中方法均表现出良好的结果。Kaufmann等以HLB柱作为前处理SPE柱，LC-TOF/MS测定了肌肉、肝和肾中100种兽药残留，60%的化合物回收率大于80%。Stolker等对牛奶中多类兽药残留进行了测定，方法采用StrataX SPE柱进行前处理，LC-TOF-MS进行测定，回收率在80%～120%之间的药物占总数的88%。Koesukwiwat等采用HLB柱进行净化，对牛奶中磺胺和四环素类兽药进行了检测，方法回收率范围为72.0%～97.4%，定量限为0.6～8.6ng/mL。SPE方法具有富集能力强，基质干扰小等特点，是目前兽药检测中最为常用的前处理方法。

图22-1固相萃取程序示意图

(2)分散固相萃取(dispersive solid phase extraction，DSPE)

分散固相萃取是将固相萃取吸附剂分散到提取液中，从而起到吸附提取液杂质的作用。其具有操作简便、省时省力等特点。在此基础上开发的QuEChERS技术是DSPE最典型的应用，其操作过程如图22-2所示，样品由乙腈或酸乙腈溶液进行提取，经盐析分配后，采用固相吸附剂对提取液中的共提物进行净化，最后由仪器进行检测。

图22-2 QuEChERS 程序示意图

QuEChERS技术作为一-种多残留分析的新技术主要用于果蔬中农药多残留检测过程中，AOAC和欧盟先后发布了基于此技术的方法标准(AOAC 2007.01和EN 15662：2008)，Agilent、Waters等多个公司也相继推出了基于该项技术的产品。由于QuEChERS技术具有简便，快速，高效等特点，近年来也开始应用于兽药残留检测领域。但与农药残留检测基质不同，动物源食品中色素相对含量较低，而脂类，蛋白等杂质含量较高。因此，针对动物源性食品，常用的净化吸附剂有PSA，C18，NH2等，也有部分方法没有涉及净化步骤，如Aguilera-Luiz等对牛奶中18种兽药残留的测定，GomezPerez等对奶酪中17种兽药残留的测定。该技术也被应用至不同的动物源性食品中，包括肉类(猪、牛、羊、鸡)、鱼类、乳制品、婴幼儿食品等。Posyniak等利用C18吸附剂对样品进行分散固相萃取，通过液相色谱对鸡肌肉组织中的磺胺类药物残留进行了测定，方法回收率在90%以上，检出限在1~5ug/kg之间，方法简单、快速、高效。Stubbings等采用QuEChERS方法对动物组织中41种兽药残留进行了测定，方法采用1%醋酸乙腈溶液提取，500mg NH2作为吸附剂进行净化，方法平均回收率为74.3%。Frenich等对鸡蛋中25种兽药残留进行了测定，方法对SPE，MSPD和QuEChERS等前处理技术进行了比较，实验结果表明SPE净化效果较好，但QuEChERS方法过程简单快速。Vidal等采用QuEChERS技术对牛奶中的21种兽药残留进行了测定，回收率在65.9%～122.3%之间，检出限在0.1～4μg/kg之间。QuEChERS方法具有前处理步骤简单，检测成本低廉，可实现样品的批量化处理等特点。

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