21.2.1.7 分析条件的选择

(1)提取净化条件的选择

1)样品提取液的选择

阿维菌素类易溶于乙酸乙酯、乙腈，许多文献报道选用乙酸乙酯、乙腈作为提取溶剂，考虑到采用乙酸乙酯作提取溶剂时会引入大量的动物组织中的脂溶性杂质，试验表明，采用乙腈提取阿维菌素类，回收率理想，因此本实验选用乙腈作为提取溶剂。

2)固相萃取净化条件的选择

动物组织中含有大量的脂肪，如带入液相色谱中会严重影响色谱的分离，在多数的曾药残留检测中会采用正己烷脱脂的方式，但由于阿维菌素类药物在正己烷中有一定的溶解度，若用正己烷脱脂会造成损失，因此考虑采用中性氧化铝进行样品提取液的净化处理。市售的中性氧化铝其活性难以控制，活性不同其净化效果相关较大，使用时需通过控制填料中的水分来调节活性，担任较繁琐，采用固定活性的中性氧化铝有利于保证样品提取的一致性。

(2)仪器条件的优化

1)质谱条件的优化

阿维菌素的质谱测定文献报道有采用ESI源和APCI源，实验中发现试验介质为甲醇-水体系时，阿维菌素的ESI谱中主要的离子峰是加合峰，即阿维菌素药物分子与流动相中的杂质离子(钠、铵等)形成加合离子，当改用APCI源时所研究的四个阿维菌素类药物均获得稳定的分子离子峰，采用负离子监测方式可获得很好的信噪比，基线噪声几近为零。

蠕动泵以10μL/min的流速连续注射0.1mg/L的阿维菌素类标准溶液入APCI电离源中，在负离子检测方式下对四种阿维菌素类类进行一级质谱分析(Q1扫描)，得到分子离子峰，对各准分子离子峰进行二级质谱分析(子离子扫描)，得到碎片离子信息。确定定性用的各离子对。

2)色谱条件的优化

APCI源可允许使用较大的流动相流速，色谱柱也可采用较为常规的确4.6口径柱；流动相中加入少量的三乙胺有助于提高阿维菌素类药物的离子化效率，从而提高检测灵敏度。

21.2.1.8线性范围和测定低限

用乙腈配成0μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0ug/L和50.0μg/L的混合标准工作液，在选定的色谱和质谱条件下进行测定,以标准工作溶液被测组分峰面积对标准溶工作液被测组分浓度作线性回归曲线。其线性方程、相关系数见表21-4。本方法对阿维菌素类药物残留的测定低限(LOQ)为4.0μg/kg。

表21-4 阿维菌素类的定量离子对、线性方程、相关系数

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