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阿维菌素类药物残留分析技术——提取方法

[db:作者] / 2022-12-26 00:00

21.1.4 残留分析技术

  

21.1.4.1 前处理方法

  

动物源食品基质主要包括动物组织、牛奶、水产品等,成分复杂,在对残留AVMs进行分析测定前,一般需要进行样品前处理,将痕量AVMs从复杂基质中富集出来。

  

(1)提取方法

  

在样品提取前,必须进行充分的均一化,以保证样品的代表性。在加入溶剂提取时,多数是使用均质器进行提取,以保证提取效率。AVMs常用的提取方法主要有液液萃取(LLE)、加压溶剂萃取(PLE)、分散液液微萃取(DLLME)和超临界流体萃取(SFE)。

  

1)液液萃取(liquid liquid extraction,LLE)

  

鉴于AVMs的高脂溶性,可用多种有机溶剂进行提取,水溶性的有机溶剂如乙腈、甲醇,与基质的互溶性较好;乙酸乙酯、异辛烷也有采用。

  

杨君宏等采用乙腈振荡提取牛肌肉组织中的AVM、IVM和EPR,酶联免疫(ELISA)试剂盒测定。空白牛肌肉组织中以5ng/g、10ng/g和20ng/g浓度添加时,AVMs回收率为70.9%~108.6%,变异系数(CV)为3.7%~17.1%。王亮用乙腈高速(10000r/min)匀浆提取牛肉中IVM残留,沉淀物用乙腈重复提取,经固相萃取净化后,高效液相色谱法(HPLC)测定。方法检出限(LOD)为0.05μg/mL,在1~100μg/mL范围内,回收率在75.9%~96.3%之间。郑卫东等建立了猪肝脏中AVM和IVM残留量的检测方法。猪肝样品均质后用乙腈提取,固相萃取柱净化后,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测。该方法LOD均为2.0ug/kg,定量限(LOQ)为5.0ug/L;在添加水平2~20μg/kg范围,AVM和IVM的平均回收率分别为77.0%~83.3%和76.9%~79.8%,相对标准偏差(RSD)分别小于12.1%和13.0%。卢志晓等采用乙腈提取冻虾中AVM、IVM、DOR和EPR残留,超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定。4种分析物在2μg/kg、10μg/kg、20μg/kg加标水平的平均回收率为75.1%~92.5%,RSD为6.78%~9.89%;四种AVMs的LOD均可达到0.5μg/kg。贾方等用乙腈提取牛筋样品中的AVM和IVM,经固相萃取柱净化和衍生化后,用HPLC分析。AVM和IVM的LOD分别为2.5~4.0ng/g;在3个加标浓度水平下,AVM和IVM的回收率在81.6%~101.0%和101.5%~102.4%之间,RSD均不大于2.0%。

  

程林丽等用乙腈提取牛奶中残留的AVM、IVM、DOR和EPR,加水和微量三乙胺稀释,固相萃取柱净化,氮气吹干并衍生化后,用HPLC测定。在2~1000ug/kg添加范围,各药物的回收率为70.2%~110.4%,批内CV为3.9%~8.2%,批间为5.1%~8.2%;EPR、AVM、DOR和IVM的LOD依次为0.5μg/kg、0.5μg/kg、0.4μg/kg和0.2μg/kg,LOQ依次为1.8μg/kg、1.6ug/kg、1.3μg/kg和0.8μg/kg。石艳丽等用乙腈作为血浆中蛋白质的沉淀剂和DOR的提取剂,离心后上清液旋转蒸干,固相萃取净化后,HPLC测定。方法LOD为0.1ng/mL;样品的回收率为89.5%~95.67%,不同浓度水平的日内CV和日间CV分别小于4%和5%。汪芳等建立了犬血浆中SEL含量的检测方法。用乙腈作为血浆蛋白沉淀剂,固相萃取柱进行净化,HPLC检测。方法的LOD为0.25ng/mL,CV为1.47%~3.31%,样品平均回收率为94.0%。

  

张文娟等建立了10种食品基质中AVM、IVM、DOR、EPR、MOX和SEL的残留分析方法。采用乙腈提取,经固相萃取净化后,UPLC-MS/MS测定。3个添加水平下,6种药物的回收率在60%~99%之间,RSD为0.2%~8.9%;6种药物的LOQ均达5.0μg/kg。张睿等建立了同时检测动物源性食品中的AVM、IVM、DOR、MOX残留量的方法。样品经乙腈提取,固相萃取小柱净化和衍生后,再用HPLC进行检测。方法LOD达到0.001mg/kg,回收率在92%~101%之间。

  

杨君宏等采用甲醇震荡提取牛肝中的AVM、IVM和EPR,ELISA试剂盒测定。空白牛肝脏组织中以20ng/g、50ng/g和100ng/g浓度添加时,AVMs回收率为53.8%~80.4%,CV为3.4%~17.9%。Massarollo等建立了蜂蜜中AVM的测定方法,采用甲醇-乙酸乙酯-正已烷提取,固相萃取净化后,HPLC测定。方法回收率为73.4%~97.45%,RSD在0.91%~13.7%之间;LOD和LOQ分别为0.002和0.007mg/kg。

  

徐英江等研究了水产品中IVM、AVM、EPR、DPR的分析方法。样品用异辛烷进行提取,经液液萃取净化和衍生后,HPLC检测。所有药物的LOD均能达到1.0μg/kg。在添加1~50μg/kg浓度范围,平均回收率为78.9%~106%,RSD为5.8%~11.2%。Hino等采用异辛烷提取牛组织中的AVM及其代谢物、IVM、EPR、DOR和MOX残留,LC-MS/MS测定,基质匹配标准曲线定量。方法回收率在87.9%~99.8%之间,日内精密度为1.5%~7.4%,日间为1.5%~8.4%。

  

2)加压溶剂萃取(pressurized liquid extraction,PLE)

  

PLE是指在较高的温度(50~200℃)和压力(1000~3000psi或10.3~20.6MPa)下,用溶剂萃取固体或半固体样品的新额的样品前处理方法。与传统提取方式相比,PLE速度快、溶剂用量少、萃取效率高、待测组分回收率好,可实现全自动安全操作。Xia等采用加压溶剂萃取(PLE)提取牛组织中的4种AVMs。以乙腈-水(40+60,v/v)为提取溶剂,在100℃、10MPa下两个静态周期提取3分钟,提取液经固相萃取净化和衍生后,HPLC检测。该方法回收率为84.8%~101.8%,RSD小于10.8%;LOD和LOQ分别为0.1~0.2μg/kg和0.5~0.6μg/kg。

  

3)分散液液微萃取(dispersive liquid liquid microextraction,DLLME)

  

DLLME是2006年才问世的一种新型微萃取技术。它基于使用微量注射器将微升级萃取剂快速注入样液内,在分散剂-水相内形成萃取剂微珠,很大地扩展了有机萃取剂和水样之间相接触面,大大加快了萃取平衡的速度,使目标化合物迅速萃入萃取剂微珠内,提高了萃取效率和富集倍数。Campillo等采用DLLME提取奶中的EPR、AVM、DOR、MOX和IVM。样品采用三氯乙酸溶液沉淀蛋白,再用2mL乙腈-氯仿(9+1,v/v)提取,HPLC和LC-MS/MS测定HPLC方法的LOQ为1.0~4.7ng/g,LC-MS/MS为0.1~2.4ng/g;在0.5~50ng/g添加浓度范围,方法回收率为89.5%~105%,RSD小于9%。

  

4)超临界流体萃取(supercritical fluid extraction,SFE)

  

SFE是20世纪70年代末发展起来的一种新型物质分离技术,它是-种利用超临界状态下的流体作为提取剂进行萃取的方法,与传统萃取法相比离效率高,可通过改变温度、压力或添加少量的有机溶剂,优化萃取过程,提高提取效率。超临界流体CO2的使用相对较多,具有低毒、低成本、易处理、化学稳定性好、易于达到临界参数(临界温度31℃,临界压力74bar)等特点。SFE能同时完成萃取和分离,其分离效率高,操作周期短,传质速度快,溶解力强,选择性高,且不污染环境。Danaher等报道了采用SFE技术提取净化动物肝脏中AVM、IVM、EPR、DOR和MOX残留的分析方法。将2.5g匀浆后的样品与4g硅藻土混匀,脱水干燥后,放入两端封有聚丙烯棉和2g碱性氧化铝的萃取池。在100℃、300bar下用超临界CO2萃取,流速5L/min、AVMs被在线碱性氧化铝阱吸附,再用4mL甲酸-乙酸乙酯(70+30,v/v)洗脱,60℃下氮气浓缩,衍生后,用HPLC测定。在4μg/kg和20μg/kg添加浓度,该方法平均回收率为76%和97%,日内和日间RSD分别小于10%和16%;LOQ达到2ug/kg。该方法还被用于猪肝和羊肝的分析。Brooks等采用SFE方法提取动物组织中的AVM时,在超临界流体CO2中加入9%改性剂-乙二醇甲醚(2-methoxyethanal,EGMME),以提高萃取效率。在22ng/g添加浓度下,没有发现干扰物。

  

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