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苯并咪唑类药物测定——气相色谱法

[db:作者] / 2022-12-22 00:00

(5)气相色谱法(gas chromatography,GC)

  

GC是一种以气体做流动相的柱色谱分离分析方法,具有分离效率高、灵敏度高、分析速度快及应用范围广等特点。随着科学技术的不断进步,研究者陆续开发了--些高选择性、高特异性的检测器;同时,快速GC和全二维GC等分离技术也相继出现,使得气相色谱技术得到了不断发展与完善。由于BMZs极性较高,挥发性较低,且热稳定性较差,BMZs一般都需要经衍生化后再测定。

  

Marti等中建立了GC方法测定动物组织中ABZ、FBZ、FLU、MBZ、OFZ、OXI、TBZ和TCB等8种BMZs残留。用乙腈提取肌肉组织中的药物,正己烷脱脂,分别用C18 SPE柱和硅藻土柱净化样品,洗脱液蒸干后,置于40℃装有五氧化二磷的真空器中干燥8h,残渣用2mL丙酮复溶,过膜,加入30μL 30%(m/v) 碳酸钠和50μL 10%(v/v)碘甲烷丙酮溶液,涡动混匀,密封,置于60℃石蜡浴器中衍生化30min,冷却后,混合物用氮气吹干,残渣加1mL乙酸乙酯和1mL水,涡动混匀,取出乙酸乙酯,再用1mL乙酸乙酯萃取2次,混合乙酸乙酯提取液,氮气吹干至0.1mL,再用硫酸钠脱水后,进GC分析。气相色谱条件:色谱柱为OV-1-CB石英玻璃毛细管柱(10m×0.25mm,膜厚0.25um),载气为氦气,升温程序:60℃持续0.5min,以30℃/min从60℃升至150℃,再以6℃/min速度从150℃升至300℃,进样口温度270℃,检测器温度350℃,不分流,进样量1uL。甲基化衍生物分别用氮磷检测器(NPD)和电子捕获检测器(ECD)测定,研究发现,NPD较ECD测定的杂质干扰少;采用ECD只能检测到TBZ衍生物,而NPD可检测所有BMZs衍生物。该方法的LOD在20~50μg/kg之间。

  

(6)气相色谱-质谱法(gas chromatography -mass spectrometry,GC-MS)

  

GC-MS将GC的高分离效率、高灵敏度与MS的高选择性集为一体,通过分析质谱图和气相保留值,能对多组分混合物进行定性鉴定和分子结构的准确判断;并通过峰匹配法、总离子流质量色谱法、选择离子检测法,对待测物进行定量分析。GC-MS已经成为痕量物质分析的重要手段之一,广泛地应用于食品分析、石油化工、医药卫生等许多领域。GC-MS分析BMZs一般要经甲硅烷基化、甲基化、苄基化等衍生作用后再测定。

  

Wilson等采用GC-MS确证了肝脏和肌肉组织中的TBZ、TBZ-5-OH、ABZ-NH2-SO2、FBZ、CAM、MBZ和OFZ等BMZs残留。组织提取物采用两步法衍生化:首先用2mol/L HCl在110℃反应1h,将氨基甲酸酯水解为氨基;水解产物再与N-甲基-(叔丁基二甲基硅烷基)三氟乙酰铵(MTBSTFA)反应,使一级和二级胺硅烷化,而TBZ-5-OH的苯酚功能团转化成甲硅烷基。GC采用Hewlett-Packard(12m×0.20mm,0.33μm膜厚度)气相色谱柱,进样口温度260℃,起始柱温为150℃,保持2min,然后以6℃/min的速度升温至300℃,平衡0.5min,清除时间1.5min,质谱参数为接口温度300℃,驻留时间100ms,采用电子电离(EI),SIM方式监测。在100μg/kg的添加水平下,肝脏组织平均回收率为92%,CV为8%,肌肉组织平均回收率为88%,CV为5%。该方法不适用于CAM,因为当注入三乙基氢氧化铵甲醇后,该药物会在进样口(260℃)快速烷化。Markus等建立了肝脏中ABZ的GC-MS测定方法。将0.4mL肝脏提取样品,于35℃±5℃蒸干,加入50uLMTBSTFA,涡动混匀,于100℃±4℃衍生化,每半小时取出涡动混匀一次,2h衍生完全后,用GC-MS分析。进样口温度260℃,升温程序:起始温度200℃,最终温度300℃,升温速度20℃/min,不分流,通风口流速100mL/min,载气为氦气,30~40psi,进样体积1.0~3.0μL,EI离子源温度140℃,分离器和传输线275℃±5℃,倍增器电压2000~2400eV,电子能量70eV,SIM模式监测。ABZ的LOD和LOQ分别为25μg/kg和50μg/kg。

  

Marti等建立了确证动物组织中8种BMZs残留的GC-MS方法。用乙腈提取肌肉组织中的药物,净化后,置于40℃装有五氧化二磷的真空器中干燥8h,残渣用2mL丙酮复溶,过膜,加入30uL 30%(m/v)碳酸钠和50μL 1%(v/v)五氟苄基溴(PFB-Br)溶液,涡动混匀,密封,置于60℃石蜡浴器中衍生化30min,冷却后,混合物用氮气吹干,残渣加1mL乙酸乙酯和1mL水,涡动混匀,取出乙酸乙酯,再用1mL乙酸乙酯萃取2次,混合乙酸乙酯提取液,氮气吹干至0.1mL,再用硫酸钠脱水后,进GC-MS分析。气相色谱柱为DB-1石英玻璃毛细管柱(30m×0.25mm,膜厚0.25um),载气为氦气,升温程序:60℃持续0.5min,以30℃/min从60℃升至150℃,再以6℃/min速度从150℃升至300℃,进样口温度270℃,接口炉温为300℃,进样体积1uL,直接接口,离子化电压为70eV,源温度250℃,质量范围为50~750amu/s,EI和正离子化学电离源(PCI)电离。该研究评估了用氨基功能团衍生化的范围,发现用PFB-Br酰化和碘甲烷甲基化均能获得较满意的结果,而甲基化产物用EI和PCI电离测定时能提供对定量有用的结构信息,但在进样和分析过程中由于高温易降解,使得定量很困难。

  

 

  

 

  

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