全国服务热线:185-0176-3637
产品分类导航:
当前位置: 主页 > 企业动态 > 技术资料

苯并咪唑类药物测定——液相色谱-质谱法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(4)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)

  

LC-MS是近年来迅速发展起来的一种痕量监测分析技术,它将HPLC的高效分离能力与质谱的准确定性、鉴别能力结合在-起,实现多种组分的同时分离测定,可以大大缩短分析时间,提高分析测定的灵敏度和准确性。尤其是逐步发展起来的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)能在取得良好的分析效果的同时,进-步减少溶剂用量,缩短分析时间。

  

1)液相色谱-单四极杆质谱法(LC-MS)

  

早期测定动物组织中BMZs残留多采用液相色谱-单四极杆质谱仪(LC-MS),其常为热喷雾电离(TSP)接口、选择离子(SIM)模式。这种设备的缺点是其应用局限于有一定挥发性、分子量较小的分子,而且需要质谱诊断的离子数量多,TSP的质谱图化学噪声高。Blanchflower等建立了LC-TSP-MS测定组织中FBZ和OFZ残留的方法。用甲醇-水(2+7,v/v)从肝脏和肌肉组织中提取FBZ和OFZ,提取液用石油醚洗涤,磷酸缓冲液稀释,乙醚-乙酸乙酯(60+40,v/v)萃取,萃取液蒸干,流动相复溶后,LC-TSP-MS测定。分析柱为LiChrosorb RP18反向柱(125mm×4mm),OFZ流动相为含有0.05mol/L乙酸铵的乙腈-四氢呋喃-水(5+1+4,v/v),FBZ流动相为含有0.05mol/L乙酸铵的乙腈-四氢呋喃-水(3+1+6,v/v),流速为1.0mL/min,SIM模式监测,选择离子为[M+H]+。FBZ和OFZ的平均回收率分别为91%和86%,LOD分别为0.05μg/g和0.1μg/g。研究发现,与梯度洗脱相比,等度洗脱能提供更多可重复的MS结果。Cannavan等用LC-TSP-MS测定了牛肉中TBZ和TBZ-5-OH残留。色谱柱为Prodigy5 ODS 3(150mm×4.6mm,2um),采用0.1mol/L乙酸铵和乙腈作为流动相,梯度洗脱,流速1.0mL/min。用氘代TBZ为内标,SIM模式监测,选择离子为[M+H]+,分别扫描m/z为202、206和218的离子对,测定TBZ、D4-TBZ和TBZ-5-0H。该方法能够确证50μg/kg的TBZ和TBZ-5-OH,TBZ和TBZ-5-OH的回收率分别在96%~103%和70%~85%之间,CV分别为0.7%~4.8%和3.1%~11.5%。该作者还采用大气压化学电离(APCI)方式进行确证,发现APCI能产生四个特征离子,更适合于确证。

  

2)液相色谱-四极杆串联质谱法(LC-MS/MS)

  

最近十多年来,串联质谱(MS/MS)的应用极大提高了生物样品中BMZs残留检测和确证的能力,大多采用三重四极杆质谱,多反应监测(MRM)模式监测。

  

陈莹等采用UPLC-MS/MS建立了同时测定动物组织中噻苯哒唑、奥芬哒唑、甲苯咪唑、三氯苯哒唑和氟苯哒唑等5种BMZs的残留检测方法。色谱柱为C18柱,流动相为含0.1%甲酸的乙腈溶液和0.1%甲酸,梯度洗脱,流速为0.3mL/min,电喷雾(ESI)电离,MRM模式监测。方法LOD为0.1~0.5ug/kg,LOQ为0.2~0.7μg/kg。田德金等采用UPLC-MSMS方法检测动物组织中的FLU、FBZ、ABZ和MBZ。采用乙酸乙酯做提取剂,提取液浓缩后,用乙腈复溶,正己烷脱脂,然后过中性氧化铝柱净化,UPLC-MS/MS测定。色谱柱为C18柱,水和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.25mL/min,ESI正离子、MRM模式监测。方法回收率为60%~85%,平均CV小于15%,LOQ为1μg/kg。郭强等建立了可食性动物组织中阿苯达唑、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑砜、噻苯咪唑、5~羟基噻苯咪唑、奥芬达唑砜等7种BMZs药物及其代谢物的多残留检测的LC-MS/MS法。分析过程中以保留时间和2个MRM离子对(母离子和2个子离子)进行定性,以峰形好和响应值高的离子进行定量。结果表明,该方法的LOD为2ng/mL,LOQ为10 ng/mL,准确度和精密度都能满足残留检测的要求。De Ruyck等采用LC-MS/MS方法检测羊肝脏中MBZ及其水解产物(MBZ-OH)和次级代谢物(MBZ-NH2)。色谱柱为反相C18柱,流动相为0.1%甲酸水溶液和乙腈,梯度分离,ESI+电离,以[M+H]+离子作为检测目标,采用MRM定量。方法LOD低于1μg/kg,回收率高于90%,RSD在5%~11%之间。刘琪等建立了猪肝中14种BMZs及其代谢物的LC-ESI-MS/MS检测方法。用碱性乙酸乙酯提取,蒸干后用乙醇-0.1moL/L盐酸溶液(2+1,v/v)复溶,MCX SPE柱净化,LC-MS/MS测定。用Waters Xterra C18(2.1mm×150mm,5um)色谱柱分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.2mL/min,ESI+、MRM模式检测。14种BMZs及其代谢物的标准溶液在10~1000μg/L浓度范围内线性关系良好,R2均大于0.99;方法LOD为5ug/kg,LOQ为10μg/kg;在10~200μg/kg添加浓度范围内,回收率均在70%~120%之间,批内、批间RSD均小于20%。

  

De Ruyck等建立了鸡蛋中FLU及其代谢物(FLU-HMET 和FLU-RMET)的LC-MS/MS检测方法。用碱化的乙酸乙酯作为提取液,提取液在60℃蒸至4~5mL,转至刻度试管,氮气吹干,残渣溶于600μL甲醇,混匀后在60℃水浴中加热5min,用2mL正己烷脱脂1~2次,溶液再用甲醇定容至1mL,并在60℃水浴中加热2min,过0.2μm聚四氟乙烯滤膜,LC-MS/MS测定。色谱柱为RP-C18柱,乙酸铵缓冲液和乙腈为流动相,梯度洗脱,流速0.25mL/min,进样量10μL,ESI+电离,以[M+H]+离子作为检测目标,采用MRM确证,以氯苯并咪唑作为内标,制作基质加标标准曲线定量。方法LOQ约为1μg/kg,总体平均回收率大于77%。

  

De Ruyck等还建立了检测牛奶中8种驱虫药(包括TBZ、OFZ、FBZ、OXI、ABZ、FEB和TCB)的LC-ESI-MS/MS多残留检测方法。色谱柱为C18柱,0.1%甲酸和乙腈为流动相,梯度洗脱,ESI电离,监测[M+H]+离子,用MRM确证,并计算了1μg/kg(禁用药)和MRL值(限用药)添加水平的检测限(CCa)和检测能力(CCβ)。方法LOD小于0.6μg/kg,回收率在89.6%~102.0%之间,CV在5.4%~11.6%之间。汤娟等建立了LC-MS/MS测定全脂和脱脂奶粉中奥芬达唑、阿苯达唑和芬苯达唑3种BMZs残留的方法。通过比较不同溶液的提取效率,最终选择含1%乙酸的甲醇作为提取溶液,正己烷和阳离子SPE两步净化,有效去除奶粉基质中的抑制干扰物。以乙腈和含0.5mmol/L醋酸铵及0.1%甲酸的水溶液为流动相,C18作为分析色谱柱,采用梯度洗脱方式进行LC分离。脱脂奶粉和全脂奶粉3个添加水平的回收率范围为70.0%~85.8%,RSD均小于7.5%,方法LOD为10μg/kg,能满足现有各国残留限量要求。

  

Wojnicz等开发了一种简单快速的LC-MS/MS方法测定血浆中的ABZ及其代谢物ABZ-SO2。样品经SPE提取净化后,以1%乙酸溶液-甲醇(4+6,v/v)为流动相,在Zorbax XDB-CN柱上等度洗脱,ESI电离,MRM模式监测。ABZ和ABZ-SO2的LOQ分别为5和10ng/mL,在LOQ添加水平下,RSD不超过20%。

  

Whelan等采用LC-MS/MS在MRL水平对TCB残留进行了定量和定性分析。采用改进的QuEChERS方法提取TCB残留,ESI质谱分析。常见流动相添加物由于pK。值小于2,造成电离不充分,从而导致线性较差,而使用含有三氟乙酸(pK。0.3)的流动相,形成了TCB代谢产物的质子化准分子离子[M+H]+,可以对肝脏、肌肉和牛奶中TCB残留在欧盟MRL(分别为250μg/kg、225μg/kg和10μg/kg)下进行确证分析。所有待测物在2.23min内出峰;牛奶和组织中动态线性范围分别为1~100μg/kg和5~1000μg/kg;肝脏、肌肉和牛奶中CCa范围分别为250.8~287.2μg/kg、2554.9~290.8ug/kg和10.9~12.1μg/kg。

  

3)液相色谱-离子阱质谱法(LC-MSn)

  

从20世纪80年代中期开始,离子阱开始成为有机质谱的质量分析器。单一-的离子阱在空间上用于较大范围内不同质荷比离子的检测,在时间上又可以用于串联质谱,灵敏度较四极杆质量分析器高10~1000倍。与四极杆串联质谱的不同之处在于四极杆串联质谱是“空间上”的串联,而离子阱质谱是“时间上”的串联。Kai 等建立了检测动物组织中ABZ、FBZ、ABZ-NH2-SO2、MBZ、OXI、TBZ、TBZ-5-OH、TCB和5-氯-6-(2,3-二氯-苯氧基)-苯并咪唑-2-环戊酮等9种BMZs的LC-MSn方法。用Discovery HS F5五氟苯基键和相色谱柱分离,流动相为0.2%甲酸-乙腈(50+50,v/v),等度洗脱,流速0.2mL/min;LC-MSn在ESI电离、增强离子扫描(EPI)、MRM模式下监测。该方法的LOD为0.005~0.05ng/g。

  

百检网就是一家权威的食品检测机构,提供各种检测需求服务,有任何疑问欢迎电联或者在线咨询客服。