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喹噁啉类药物残留测定方法——液相色谱-质谱法

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

(4)液相色谱-质谱法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)

  

由于本类药物的毒性,许多国家严格控制或禁止临床应用,对检测灵敏度提出了更高要求,而LC-MS检测灵敏度高、特异性好,应用报道逐渐增多。喹嗯啉类药物及其代谢物的LC-MS检测主要采用电喷雾电离(ESI)方式,并可选择正离子和负离子两种监测模式;也有采用大气压化学电离(APCI)的测定方法报道。

  

1)APCI电离

  

Merou等采用LC-MS/MS测定猪、牛肌肉和猪肝中CBX、QCA和MQCA。色谱柱为ODS柱(150mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,流动相为1%乙酸和1%乙酸甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.7mL/min,采用APCI正离子扫描,毛细管电压320℃,脱溶剂温度450℃,放电电压7μA,多反应监测模式(MRM)检测。CBX、MQCA和QCA的CCa为0.09~0.24ug/kg,CCβ为0.12~0.41ug/kg,回收率为92%~101%(MQCA、QCA)和60%~62%(CBX),CV小于12%。

  

2)ESI电离

  

A.负离子检测

  

本类药物的代谢物为酸性物质,LC-MS检测可选择负离子模式。我国国家标准GB/T22984-2008)检测牛奶和奶粉中QCA和MQCA。采用ODS色谱柱(3um,100mm×2.1mm)分离,流动相为甲醇-乙腈以及0.1%甲酸,梯度洗脱,流速0.2mL/min,串联质谱(MS/MS)在ESI负离子、MRM模式下检测。牛奶和奶粉中平均回收率为68.2%~82.5%,RSD为3.4%~12%;牛奶中LOQ均为0.5μg/kg,奶粉中均为4.0ug/kg。Sniegocki等测定猪肉中CBX及其代谢物BDCBX和QCA、OLQ及其代谢物MQCA,采用QCA-d4为内标,LC-MS/MS测定。色谱柱为Luna C8(100mm×2mm,3um),保护柱为C8(4mm×2mm,3um),流动相为0.5%异丙醇-1%乙酸溶液和甲醇,梯度洗脱,柱温25℃,流速0.4mL/min,ESI负离子,毛细管电压-4500V,脱溶剂温度400℃,检测器增益电压2100V,
MRM模式检测。方法CCa为1.04~2.11μg/kg,CCβ为1.46~2.89μg/kg,回收率为99.8%~101.2%。质谱测定QCA和BDCBX时表现为基质抑制,MQCA为基质增强,而采用同位素内标校正后,测定更为准确。

  

B.正离子检测

  

相比负离子检测,采用正离子模式检测的报道更多。检测正离子时,流动相中可加酸来提高检测灵敏度

  

Hutchinson等用LC-MS/MS检测猪肝中QCA,色谱柱为C18(150mm×4.60mm,5μm),流动相为甲醇-水-乙酸(40+59.6+0.4,v/v),流速1.0mL/min,分流0.2mL/min,质谱ESI正离子,MRM检测。离子源温150℃,干燥气和雾化气均为氮气,流速分别为500 L/h和80 L/h。方法回收率为89%~111%,CV为0.15%~10%,CCa 和CCβ分别为0.16μg/kg和0.27μg/kg。Horie等用LC-MS/MS测定猪肉和肝脏中CBX、BDCBX、QCA,采用C18色谱柱(100mm×3.0mm,2.6um),流动相为甲醇、乙腈以及0.2%甲酸,梯度洗脱,流速0.30mL/min,ESI正离子扫描,MRM模式监测。QCA的回收率为70.2%~86.3%,LOQ 为1μg/kg。

  

Zhang等建立了鱼肉组织中OLQ代谢物MQCA的超高效液相色谱(UPLC)-ESI+-MS/MS残留分析方法。色谱柱为UPLC BEH C18(2.1mm×50mm,1.7mm),柱温40℃,流动相为甲醇和0.3%甲酸溶液,梯度洗脱,流速0.3mL/min,进样体积10μL,ESI 正离子扫描,源温120℃,脱溶剂温度380℃,毛细管电压3.5kV,锥孔电压25V,锥孔气流速60L/h,去溶剂气流速600L/h,锥孔气和碰撞气分别为高纯氮气和氩气。每个样品用时间小于5min,LOD和LOQ分别为0.1和0.25ng/g,回收率为92.7%~104.3%,RSD小于6%。吕海鸾等测定畜产品和水产品中OLQ的残留标示物MQCA残留,用UPLC-MS/MS确证和定量。色谱柱为ACQUITY BEH C18 (50 mm×2.1 mm),进样量10uL,流动相为0.1%甲酸和0.1%甲酸甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.3mL/min,ESI正离子扫描,毛细管电压2.8kV,离子源温度150℃,脱溶剂温度300℃,碰撞气氩气,脱溶剂气流速为480L/h, MRM模式监测,采用外标法定量。MQCA的LOD为0.90~1.8μg/kg,LOQ为3.0~6.0μg/kg,平均回收率均在73.6%~89.0%之间,日内RSD在15%以下,日间CV低于20%。刘正才等采用LC-MS/MS测定动物源食品中OLQ代谢物MQCA残留量。色谱柱为Kinetex C18柱(100mm×3.0mm,2.6um),流动相为甲醇、乙腈以及0.2%甲酸,梯度洗脱,流速0.30mL/min,柱温35℃,进样量20μL,ESI正离子扫描,MRM模式监测,电喷雾电压4500V,气帘气压力0.172 MPa(氮气),离子源温度550℃,雾化气压力0.379MPa,辅助气压力0.379 MPao MQCA的LOQ分别为:鰻鱼0.4 μg/kg、虾0.3 μg/kg、猪肉0.5μg/kg、鸡肉0.3ug/kg、牛肉0.5 ug/kg、猪肝0.5 ug/kg,远低于国内外对MQCA的MRLs规定,回收率在60.7%~107%之间,RSD在4.59%~14.9%之间。

  

Hutchinson等建立了猪肝中QCA和MQCA的LC-ESI-MS/MS确证方法。色谱柱为C18柱(150mm×2.0mm),流动相为甲醇-乙腈-水-乙酸(10+10+79.6+0.4,v/v), 流速0.2 mL/min,进样体积15μL,质谱源温150℃,ESI+扫描,MRM检测QCA产物离子m/z 102和75,MQCA产物离子m/z145和102,采用稳定氘代同位素内标定量。QCA的CCa和CCβ分别为0.4μg/kg和1.2μg/kg, MQCA分别为0.7μg/kg和3.6μg/kg。Boison等用LC-MS/MS测定猪组织中CBX和OLQ及其代谢物QCA和MQCA残留。色谱柱为Nova-Pak C18 (2.1mm×150mm,4um),流动相为0.04%甲酸-甲醇,梯度洗脱,流速0.2mL/min,分流,进入质谱流速为0.08 mL/min,ESI 正离子、MRM检测,毛细管电压2.75kV,锥孔电压27V,源温100℃,脱溶剂温度150℃。BDCBX和QCA的LOQ分别为0.05μg/kg和0.5μg/kg,LOD分别为0.025μg/kg和0.3ug/kg;MQCA的LOQ为0.5μg/kg,LOD 为0.3μg/kg;回收率在80%~120%。
Zeng等开发了一种快速测定猪肌肉、肝脏、肾脏中MQX的5个代谢物的LC-MS/MS方法。样品经酸水解,用SPE净化后,进LC-MSMS在ESI正离子源下测定。满足确认所需的两对转化离子,以及可接受的相对离子强度。方法CCa在0.6~2.9μg/kg之间,CCβ介于1.2~5.7μg/kg;回收率为75.3%~107.2%,RSD小于12%。Liu等报道了采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)测定猪肝脏中MQX及其代谢物(l-desoxymequindox和BDMQX)的方法。用酸性乙腈提取,Oasis MAX柱净化后,通过UPLC分离,用含0.1%甲酸的甲醇进行梯度洗脱,色谱分析总时间少于8min。ESI-MS/MS在MRM模式下进行数据采集。在2~100μg/kg的添加水平下,方法回收率范围为80%~85%,日内CV小于等于14.48%,日间CV小于等于14.53%;LOD范围为0.58~1.02μg/kg,LOQ范围为1.93~3.40ug/kg。

  

C.正负离子切换检测

  

还可以通过质谱电离方式切换,同时检测正负离子。Horie等建立了检测猪肌肉和肝脏中CBX及其代谢物QCA和BDCBX的方法。色谱分离采用Cadenza CD-C18柱(10cm×2mmid.),流动相为0.01%乙酸-乙腈,梯度洗脱,流速0.2mL/min,LC-ESI-MS测定,SIM模式监测(QCA检测[M-H],BDCBX检测[M+H]+)。检测浓度在0.01~0.5ng时,呈良好线性,回收率为70.2%~86.3%,LOD均为1ng/g。

  

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