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喹噁啉类药物残留分析技术——净化方法(三)

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

3)离子排阻色谱(ion-exclusion chromatography)

  

离子排阻色谱基于样品分子量和体积大小的不同,而对样品进行分离的色谱法。固定相是有一定孔径的多孔填料,小分子量的化合物进入孔中;流动相是可以溶解样品的溶剂;分离过程是按分子量大小的顺序,分子量大的化合物先从柱中洗脱出来。

  

Huang等应用色谱填料AG MP-50(25cm×10.5mm,7g)净化鸡、猪组织中QCT代谢物MQCA。10mL 0.5mol/L的柠檬酸萃取液中加入2mL浓盐酸酸化,注入离子排阻色谱,用40mL 1mol/L盐酸淋洗,用50mL甲醇-水(1+1,v/v)洗脱,再经过LLP净化后,用HPLC测定。回收率为74%~84%,CV为4.5%~10.8%,LOD和LOQ分别为0.025mg/kg和0.05mg/kg。Huang等也用AG MP- 50resin离子排阻色谱(25cm×10.5mm)净化鸡肌肉、肾脏、脂肪和肝脏中QCA的残留。在碱性条件下水解结合态的QCA,水解液用盐酸中和,用乙酸乙酯提取,提取液再用0.5mol/L柠檬酸缓冲液反萃取,柠檬酸萃取液用2mL浓盐酸酸化后,上AGMP-50resin离子排阻色谱柱净化,用30mL1mol/L HCL淋洗,用40mL甲醇-水(10+90,v/v)洗脱,洗脱液中加入2mL浓盐酸,再用三氯甲烷反萃取,蒸干萃取液,甲醇复溶后,用HPLC测定。QCA的LOQ为0.025mg/kg(血浆和内脏组织)和0.02mg/kg(肌肉);回收率为70%~87%,日间RSD为7.69%~1.43%。Zhang等用同样规格和型号的离子排阻色谱柱净化羊组织中的CYX代谢物QCA,柠檬酸萃取液用2mL浓盐酸酸化后,上AG MP-50 resin离子排阻色谱柱净化,用50mL 1mol/L HCL淋洗,用75 mL甲醇-水(10+90,v/v)洗脱,洗脱液中加入21 mL浓盐酸,再用三氯甲烷反萃取,蒸干萃取液,甲醇复溶后,HPLC测定。QCA回收率为70%~82%,日间CV为6.7%~11.1%;LOD为15μg/kg,LOQ为25ug/kg。

  

4)分子印迹技术(molecular imprinting technology,MIT)

  

MIT基本原理为当模板分子(印迹分子)与聚合物单体接触时会形成多重作用点,通过聚合过程这种作用就会被记忆下来,当模板分子除去后,聚合物中就形成了与模板分子空间构型相匹配的具有多重作用点的空穴,这种聚合物叫分子印迹聚合物(MIP),这样的空穴将对模板分子及其类似物具有选择识别特性。

  

Duan等建立了基于MIT净化动物肌肉中QCA和MQCA的HPLC测定方法。将QCA和功能单体二乙胺基甲基丙烯酸乙酯(DEAM)溶解于无水四氢呋喃,在50C涡动2h,然后加入交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)和引发剂偶氮二异丁腈(AIBN),超声处理20min,氮吹脱氧,然后60℃水浴24h完成聚合,粉碎后得到MIP。将100mg MIP装入3mL SPE管中,用5mL甲醇,5mL水平衡,加入QCA和MQCA酸性提取液(pH3.0),以3.5mL/min流速流出,用2mL甲醇淋洗,3mL 1%乙酸甲醇溶液洗脱,洗脱液吹干复溶于0.5mL甲醇-水(1+1,v/v),过膜后HPLC测定。猪、鸡、鱼肌肉中QCA和MQCA的回收率为60.0%~119.4%,RSDs小于5%;QCA的LOD分别为0.1μg/kg、0.3ug/kg、0.1ug/kg,MQCA分别为0.2ug/kg、0.3μg/kg、0.1ug/kg。魏玉伟采用热引发本体聚合的方法合成OLQ的MIP。在吡啶中加入模板分子OLQ,超声溶解,依次加入甲基丙烯酸(MAA)、EDMA和醋酸,在50℃热引发聚合。将制得的MIP于40℃烘干,作为基质固相分散萃取(MSPD)的吸附剂来特异性吸附肉制品中的OLQ残留。将该MIP与等量鱼肉充分研磨接触,放置30min后,装入注射器,用8mL正已烷洗涤,抽干后,用乙腈-乙酸乙酯(1+1,v/v)洗脱,洗脱液旋转蒸发至干,用流动相定容后,供HPLC测定。鱼肉中添加1.5mg/kg的OLQ时,回收率为89.72%,CV为1.59%。