14.2.2.1 适用范围

适用于牛奶和奶粉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限为：对于牛奶，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林均为5.0ug/kg；对于奶粉，4-甲酰氨基安替比林、4-氨基安替比林、4-甲 基氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林均为40.0ug/kg。

14.2.2.2方 法原理

牛奶和奶粉中安乃近代谢物残留加入TRIS溶液后用乙腈提取，提取液经正己烷脱脂净化，液相色谱-串联质谱仪测定。4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林采用外标法定量，4-甲基氨基安替比林采用内标法进行定量。

14.2.2.3 试剂和材料

甲醇、乙腈、乙酸铵：色谱纯；异丙醇、三羟甲基氨基甲烷(TRIS)：分析纯。

1.0 mol/L TRIS溶液：准确称取12.1g三羟甲基氨基甲烷，用水定容至100mL；样品定容溶液：甲醇-水(1+19，v/v)；5mmol/L乙酸铵溶液：准确称取0.385g乙酸铵，用950mL水溶解，用乙酸将溶液调至pH3.0，再加水定容至1000mL。

4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林标准物质：纯度≥99%。
内标标准物质：4-异丙基氨基安替比林(4-isopropylantipyrine，C14H19N2O)，纯度≥99%。

100 mg/L标准储备溶液：准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质，用甲醇配制成浓度为100 mg/L的标准储备溶液，避光-18℃保存。

1.0mg/L混合标准储备溶液：吸取每种适量标准储备溶液，用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液，避光-18℃保存。

100mg/L内标储备溶液：准确称取适量的内标标准物质用甲醇配制成浓度为100mg/L标准储备溶液，避光-18℃保存。

1.0mg/L内标工作溶液：吸取适量的内标储备溶液，用甲醇稀释成1.0mg/mL的内标标准工作溶液，避光-18℃保存。

基质混合标准工作溶液：吸取适量的混合标准储备溶液和适量内标工作溶液，用空白样品提取液配成浓度为1.0ug/L、5.0ug/L、10.0ug/L、20.0ug/L、40.0ug/L、100ug/L和内标浓度为10.0ug/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

14.2.2.4 仪器和设备

液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)；旋转蒸发仪；旋涡混匀器；分析天平：感量0.1mg和0.01g；移液器：10～100μL和100～1000μL；带刻度聚丙烯离心管：15mL和50mL，具塞；低温离心机：转速大于5000r/min，可制冷到4℃；容量瓶：25mL；鸡心瓶。

14.2.2.5 样品前处理

(1)试样制备

取不少于500g有代表性的牛奶或奶粉，充分混匀，分为两份，置于样品瓶中，密封，并作上标记。牛奶置于4℃冰柜中避光保存，奶粉则在室温下置于干燥器保存。

(2)提取

a.牛奶样品：称取5g试样，精确至0.01g，置于50mL带刻度的聚丙烯离心管中，加入100μL内标工作溶液和0.5mL 1.0mol/L的TRIS溶液，再加入10mL乙腈，旋涡混合1min，振荡提取15min，4℃下5000r/min离心5min，提取液转移至25mL容量瓶中。再加入8mL乙腈，重复上述操作，合并提取液，用乙腈定容至25mL，混匀。

b.奶粉样品：取12.5g奶粉，精确至0.01 g，置于100 mL烧杯中，加适量35～50℃水将其溶解，待冷却至室温后，加水至总重量为100g，充分混匀后准确称取5g(精确到0.01g)样品于50mL聚丙烯离心管中，按牛奶提取步骤进行处理。

(3)净化

取5.0mL提取液至干净的15mL离心管中，加入3.0mL乙腈饱和过的正已烷，漩涡振荡3min，4℃下5000r/min离心5min，弃去正己烷层。

将乙腈层转移至鸡心瓶中，再加入5.0mL异丙醇，在40℃下旋转蒸发至近干。残渣加入1.0mL样品定容溶液溶解，混匀后过滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。

(4)空白基质溶液的制备

称取阴性样品5g(精确至0.01g)，按上述提取净化步骤操作。