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液相色谱-串联质谱法测定牛和猪肌肉中安乃近代谢物残留量

[db:作者] / 2022-12-21 00:00

14.2.1.1 适用范围

  

适用于牛和猪肌肉中4-甲酰氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲基氨基安替比林和4-氨基安替比林残留量的液相色谱-串联质谱测定。方法检出限:4-甲酰氨基安替比林为1.8μg/kg;4-氨基安替比林和4-甲基氨基安替比林为1.5 ug/kg;4-乙酰氨基安替比林为1.0ug/kg。

  

14.2.1.2 方法原理

  

肌肉中安乃近代谢物残留用硫酸钠溶液(pH=7)提取,过滤后,经Bond Elut C18固相萃取柱或相当者净化后,用甲醇洗脱,氮气吹干。残渣用甲醇+水溶解,供液相色谱-串联质谱仪测定,内标法或外标法定量。

  

14.2.1.3 试剂和材料

  

甲醇、乙腈、醋酸铵:色谱纯;硫酸钠、亚硫酸钠:分析纯。

  

硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液:准确称取14.20g无水硫酸钠和2.52g亚硫酸钠,用水溶解,并使其体积达到约950mL,然后用0.5mol/L的稀硫酸调节溶液的pH至7.0,用水定容至1000mL;淋洗液:甲醇+水(1+19,v/v);样品定容液:甲醇+水(1+9,v/v)。

  

4-甲基氨基安替比林、4-乙酰氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-氨基安替比林标准物质:纯度≥99%。
内标标准物质:4-异丙基氨基安替比林,纯度≥99%。

  

标准储备溶液:100mg/L。准确称取适量的各种安乃近代谢物标准物质,用甲醇配制成浓度为100 mg/L的标准储备溶液,避光-18℃保存,可使用3个月。

  

混合标准储备溶液:1.0mg/L。吸取每种适量标准储备溶液,用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液,避光-18℃保存,可使用1个月。

  

内标储备溶液:准确称取适量的内标标准物质用甲醇配制成浓度为100mg/L标准储备溶液,遇光-18℃保存,可使用3个月。

  

混合标准储备溶液:1.0mg/L。吸取每种适量标准储备溶液,用甲醇稀释成1.0mg/L的混合标准工作溶液,避光-18℃保存,可使用1个月。

  

内标储备溶液:准确称取适量的内标标准物质用甲醇配制成浓度为100 mg/L标准储备溶液,避光-18℃保存,可使用3个月。

  

内标工作溶液:0.20mg/L。吸取适量的内标储备溶液,用甲醇稀释成0.20mg/mL的内标标准工作溶液,避光-18℃保存,可使用1个月。

  

基质混合标准工作溶液:吸取适量的混合标准储备溶液和适量内标工作溶液,用空白样品提取液配成浓度为1.0μg/L、5.0μg/L、10.0ug/L、20.0μg/L、40.0ug/L和内标浓度为0.20mg/L的基质混合标准工作溶液。当天配制。

  

Bond Elut C18固相萃取柱或相当者:500mg,3mL。用前分别用5mL甲醇和5mL水处理,保持柱体湿润。

  

14.2.1.4仪器和设备

  

液相色谱-串联质谱仪:配有电喷雾离子源(ESI);固相萃取装置;氮气浓缩仪;旋涡混匀器;分析天平:感量0.1mg和0.01g;真空泵;均质器;移液器:10~100μL和100~1000μL;聚丙烯离心管:50mL,具塞;pH计:测量精度±0.02;低温离心机:可制冷到4℃;玻璃离心管:15mL。

  

14.2.1.5样品前处理

  

(1)试样制备

  

取有代表性的牛或猪肌肉组织,制成实验室样品。试样分为两份,置于样品瓶中,密封,并做上标记。制备好的试样置于-18℃冰柜中避光保存。

  

(2)提取

  

称取5g试样,精确至0.01g。将上述样品置于50mL聚丙烯离心管中,加入0.25mL浓度为2.0mg/L的内标工作溶液,然后加入15mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液,均质1min,在10℃以4000r/min离心5min。将上清液转移到另一个干净的50mL容量瓶中,残渣再分别加入15mL、10mL硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液提取二次,离心后,合并上清液,并用硫酸钠+亚硫酸钠提取溶液定容至50mL,混合均匀,然后用玻璃滤纸过滤,待净化。

  

(3)净化

  

取25mL提取液放入C18固相萃取柱中,以约1mL/min的流速使样液通过固相萃取柱,待样液全部通过后,依次用5mL水和5mL甲醇+水淋洗液淋洗固相萃取柱,弃去全部流出液,减压抽干固相萃取柱10min。最后用5mL甲醇洗脱,洗脱液收集于15mL玻璃离心管中,置于氮气浓缩仪上在55℃吹至近干,用样品定容液定容至1.0mL。定容液混匀后,过0.45um滤膜,供液相色谱-串联质谱测定。

  

同时取阴性样品,按上述提取净化步骤制备空白样品提取液,用于配制基质混合标准工作溶液。