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液相色谱紫外检测法测定牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量

[db:作者] / 2022-12-20 00:00

12.2.5.1 适用范围

  

适用于牛奶和奶粉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。方法检出限:牛奶中土霉素、四环素为5μg/kg、金霉素、强力霉素为10 ug/kg。奶粉中土霉素、四环素为25 μg/kg、金霉素、强力霉素为50 ug/kg。

  

12.2.5.2 方法原理

  

用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取牛奶和奶粉中四环素族抗生素残留,Oasis HLB或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化,液相色谱仪测定,外标法定量。

  

12.2.5.3 试剂和材料

  

甲醇、乙腈:色谱纯;磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)、柠檬酸(C6H8O7·H2O)、 乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA·2H2O)、草酸(C2H2O4·2H2O): 分析纯。

  

0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液:称取71.63 g磷酸氢二钠,用水溶解,定容至1000 mL。

  

0.1 mol/L柠檬酸溶液:称取21.04g柠檬酸,用水溶解,定容至1000 mL。

  

Mcllvaine缓冲溶液:将625 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液与1000 mL 0.1 mol/L柠檬酸溶液混合,必要时用NaOH或HCI调pH=4.0±0.05。

  

0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液:称取60.50g乙二胺四乙酸二钠(4.5) 放入1625 mL mellvaine缓冲溶液中,使其溶解,摇匀。

  

0.01 mol/L草酸溶液:称取1.26g草酸,用水溶解,定容至1000 mL。

  

甲醇-水(1+19,v/v):量取5 mL甲醇与95 mL水混匀。

  

0.01 mol/L草酸-乙腈溶液(1+1,v/v): 量取50 mL草酸溶液与50 mL乙腈混匀。

  

土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质:纯度大于等于96%。

  

0.1 mg/mL土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备溶液:准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质,分别用甲醇配成0.1 mg/mL的标准储备液。储备液于-20℃保存。

  

土霉素、四环素、金霉素、强力霉素混合标准工作溶液:根据需要用流动相将土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准储备液稀释成所需浓度的混合标准工作溶液,储存于冰箱中,每周配制。

  

Oasis HLB固相萃取柱或相当者: 500 mg, 6 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理,保持柱体湿润。
羧酸型阳离子交换柱: 500 mg,6mL。 使用前用5 mL甲醇预处理,保持柱体湿润。

  

12.2.5.4 仪器和设备

  

液相色谱仪:配有紫外检测器;分析天平:感量0.1 mg,0.01g; 涡旋振荡器;冷冻离心机:转速大于5000 r/min;固相萃取装置;真空泵;氮气吹干仪; pH计:测量精度士0.02;刻度样品管: 10 mL,精度为0.1 mL。

  

12.2.5.5样品前处理

  

(1)试样制备

  

将牛奶从冰箱中取出,放置至室温,摇匀,备用。牛奶置于0~4℃冰箱中避光保存,奶粉常温避光保存。

  

(2)提取

  

牛奶试样称取10g (精确到0.01 g),置于50 mL具塞塑料离心管中。奶粉试样称取2g(精确到0.01 g),置于50 mL具塞塑料离心管中。向试样中加入20 mL 0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液,于涡旋振荡器上混合2min,于10℃ ,5000 r/min离心10 min,上清液过滤至另一离心管中。残渣中再加入20 mL缓冲溶液,重复提取一次,合并上清液。

  

(3)净化

  

将上清液通过处理好的Oasis HLB柱,待上清液完全流出后,用5 mL甲醇-水淋洗,弃去全部流出液。减压抽干5min,最后用5mL甲醇洗脱,收集洗脱液于10mL样品管中。

  

将收集的洗脱液通过羧酸型阳离子交换柱,待洗脱液全部流出后,用5 mL甲醇洗柱,减压抽干,用4 mL 0.01 mol/L草酸-乙腈溶液洗脱,收集洗脱液于10 mL样品管中,45℃氮气吹至1.5mL左右,流动相定容至2mL,供液相色谱-紫外检测器测定。

  

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