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四环素类药物残留分析技术——测定微生物法

[db:作者] / 2022-12-19 00:00

12.1.4.2 测定方法

  

TCs的残留测定方法已有大量文献报道,主要有微生物检测法、免疫分析法、薄层色谱法、毛细管电泳法、液相色谱法、液相色谱-质谱法等。目前,一些新兴的检测技术,如传感器技术、流动注射法、表面等离子共振技术等也开始在TCs残留分析中应用。

  

(1) 微生物法(microbiological analysis)

  

微生物法是测定抗生素的基本分析方法,其优点在于不需要复杂的样品前处理、不需要精密仪器、操作简便和检测费用低廉等,适用于大量样品的筛选,缺点是特异性较差,且不能用于定量检测。常用于TCs测定的是蜡状芽孢杆菌(ATCC11778),其对CTC的灵敏度为0.005mg/L,对CTC和OTC的灵敏度均为0.025mg/L,对MNC的灵敏度均为0.001~0.002mg/L。

  

林修光等建立了用标准纸片法快速测定鸡肉中TCs残留量的微生物检测方法。准确称取鸡肉样品10.0g,加入20mL磷酸盐缓冲液(pH4.5),3000~4000r/min均质2min,静置10min以上,4000r/min离心10min,取上清液检验。未出现抑菌圈者则判为TCs抗生素阴性,检验液与0.05mg/kg标准溶液如同样产生10mm以上明显的抑菌圈时,需进行加热确认试验。取两支试管分别加入检验液、0.2mg/kg TCs标准稀释液各4mL,置于沸水浴中加热30min,取两个试验平m分别放置纸片为加热检验液、加热的0.2mg/kg TCs标准稀释液、未加热的检验液、未加热的0.2mg/kg标准稀释液等四种溶液后,置于35℃孵育17h观察结果,未加热的检验液和0.2mg/kg标准稀释液出现正常的抑菌圈,加热的检验液和0.2mg/kg标准稀释液不出现抑菌圈,可判为TCs抗生素阳性。该方法的灵敏度为0.05mg/kg。DeWasch等采用微生物抑制测试筛选检测猪肉和鸡肉中的TCs残留。冻猪肉和鸡肉块用接种枯草芽孢杆菌的培养基(pH6)筛选。Mwangi等采用蜡样芽孢杆菌琼脂扩散方法,选用三个中等pH和两种家禽器官进行微生物检测,确定OTC的LOD,并评价其能否在MRLs水平可靠地检测家禽组织的OTC。LOD受生长介质的pH和抗生素浓度的影响,在低pH下,检测到肝脏和肾脏样品中OTC的抑制区显著增加,检测结果均低于MRLs(肾脏600ng/g,肝脏1200ng/g)。蜡状芽孢杆菌板在pH7的条件下能有效地对OTC进行常规筛查,在肝脏和肾脏中的LOD分别为131.3ng/mL和33.4ng/mL。

  

 

  

 

  

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