(7)液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-massspectrometry，LC-MS)

随着LC-MS技术的发展，特别是电喷雾(ESI)技术的完善，LC-MS因其快速、灵敏度高、可提供结构信息、对净化要求小等优点，已逐渐成为TCs残留分析的主要手段。

Cherlet等采用LC-ESI-MS/MS检测猪组织中的TC、4-epiTC、CTC、4-epiCTC、OTC、4-epiOTC、DC和4-epiDC残留。用0.1molL琥珀酸钠溶液(pH4.0)提取，PLRP-Spolymeric反相色谱柱(250mm×4.6mm，8μm)分离，柱温为60℃，流动相A为0.001mol/L草酸-0.5%甲酸-3%四氢呋喃溶液，流动相B为四氢呋喃，梯度洗脱；采用ESI方式检测，毛细管电压为7V，锥孔电压为130V，离子源温度为80℃，毛细管温度为200℃。方法LOD为0.5～4.5ng/g。Dasenaki等采用UPLC-MS/MS测定了鱼肉、猪肉和禽肉中的5种TCs。样品用甲醇-乙腈(50+50，v/v，含0.05%甲酸)提取，以ZorbaxEclipsePlusC18色谱柱分离，乙腈-0.1%甲酸为流动相，梯度洗脱，流速0.1mL/min，在MS/MS模式下监测碎片离子，各项指标满足欧盟指令2002/657/EC的要求。Granelli等开发了利用LC-MS/MS筛选检测动物肌肉和肾脏中19种抗生素(包括TCs)的分析方法。样品采用70%甲醇提取，用水稀释后，进LC-MS/MS检测。整个分析时间约为15min，可作为一种快速筛查方法。该作者在此基础上又对方法进行了优化，使之可以确证检测猪肉和牛肉中的该19种抗生素残留，整个分析时间缩短到7min，方法参数按照欧盟指令2002/657/EC的要求进行了验证。

岳振峰等建立了牛奶中TC、CTC、OTC、DC、DMC、MTC、MNC、4-epiTC、4-epiCTC、4-epiOTC的多残留LC-MS/MS测定方法。以pH4.0的EDTA-Mllvaine缓冲溶液为提取溶液，HLB固相萃取柱净化，采用InertsilC8-3(150mm×2.1mm，5μm)反相色谱柱分离，流动相为甲醇和0.01mol/L三氟乙酸，梯度洗脱，流速0.3mL/min，进样量为30μL。雾化气流速6.0L/min，气帘气流速10.0L/min，喷雾电压为4500V，去溶剂温度为500℃，去溶剂气流700L/min，碰撞气流6.0L/min(N2)，离子化模式为ESI+，多反应监测(MRM)模式检测。该方法的LOD为0.5～10μg/kg，LOQ为50μg/kg；线性范围为50～1200μg/L，添加回收率为74.4%～101%，RSD为1.8%～8.3%。Koesukwiwat等采用LC-MS/MS检测牛奶中的TC、CTC、OTC等10种抗生素。用SymmetryShieldRP18色谱柱(150mm×2.1mm，3.5μm)分离，柱温35℃，流动相A为乙腈-水(5+95，v/v)，流动相B为1mmol/L草酸乙腈-水(5+95，v/v)，梯度洗脱，流速为0.3mL/min，进样量为5.0μL；采用ESI正离子方式检测，毛细管电压为3.0kV，锥孔电压为130V，离子源温度为80℃，雾化温度为300℃。在12min内达到基线分离，回收率为70%～106%。贾薇等用LC-MS/MS法测定牛奶中4种TCs残留。样品经固相萃取后，采用BDS柱分离，以乙腈-水-甲酸为流动相，采用ESI离子源，以正离子检测方式进行一级、二级质谱分析。牛奶中TC、OTC及MTC的LOD可达0.1ug/mL，CTC的LOD可达0.1ug/mL；TC、OTC及MTC的浓度在0.1～5.0μg/mL内呈线性，CTC浓度在0.2～10.0μg/mL内均呈线性。连英杰等建立了利用UPLC-ESI-MS/MS同时测定原料奶及奶粉中OTC、TC、CTC、DC等4种药物的分析方法。样品经少量高氯酸沉淀蛋白、低温冷冻除脂后，用C18色谱柱分离，以0.1%甲酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱，ESI正离子模式扫描，MRM检测，外标法定量。4种TCs在1～1000ng/mL浓度范围内线性关系良好；方法LOQ为原料奶5μg/kg，奶粉25μg/kg；在10μg/kg、50μg/kg、100ug/kg水平下，加标回收率为73.4%～99.4%，RSD为0.8%～14.3%。范志影等建立了反相LC-MS/MS同时测定生鲜乳中TC、CTC、OTC和DC等药物残留的分析方法。结果表明，在1～80μg/L有较好的线性关系，方法LOD在0.1～1μg/L之间，回收率在81%～119%之间，RSD在1.23%～14.80%之间。

Carrasco-Pancorbo等报道了蜂蜜中CTC、DMCT、DC、MTC、MINO、OTC、TC和RTC等8种TCs的残留分析方法。提取物经RP-C18色谱柱分离后，用DAD和电喷雾-飞行时间质谱(ESI-Tof-MS)检测和确证。通过线性梯度分离，8种TCs在10分钟内出峰，分离良好，理论塔板数在2328～19448之间；方法LOD在0.02～1.03μg/kg之间(DAD)和0.05～0.76μg/kg之间(ESI-Tof-MS)；在10μg/kg、25ug/kg、50μg/kg、100ug/kg浓度水平，添加回收率为72%～98%。

常见TCs残留检测的部分HPLC和LC-MS方法分析条件见表12-3。

表12-3 常见TCs残留检测的部分HPLC和LC-MS方法分析条件

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