全国服务热线:185-0176-3637
产品分类导航:
当前位置: 主页 > 企业动态 > 技术资料

牛尿中a-群勃龙、β-群勃龙、19-乙烯去甲睾酮和epi-19-乙烯去甲睾酮残留量测定分析条件的选择

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

8.2.5.7 分析条件的选择

  

(1)酶解

  

群勃龙和19-去甲睾酮在样品中往往与蛋白等物质稳定结合,文献多采用β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶水解。但酶解条件各有差异(包括酶的用量、酶解温度和时间、不同缓冲液体系及pH等)。实验发现牛尿液样品在pH=5.0左右,用400个单位酶用量,在37℃酶解2h,分析物即可完全水解,回收率较高。

  

(2)提取净化

  

固相萃取技术是比较有效的净化手段,本方法对硅胶柱、C18柱、混合型柱、免疫亲和柱和C18-氨基柱串联作了实验,结果发现了C18柱、硅胶柱、混合型柱的净化效果均不佳,即使用C18-氨基柱串联法处理样品,HPLC-MS所得图谱仍有干扰,如图8-16所示。而群勃龙/19-乙烯去甲睾酮免疫亲和柱,不仅净化效果好且操作简便回收率高,故本方法采用免疫亲和柱净化样品。

  

  

图8-16 C18-氨基柱串联法处理后所得的总离子流图

  

(3)仪器条件的选择

  

1)色谱柱和流动相的选择

  

用0.1%的乙酸水溶液与乙腈作流动相,在体积比为38:62时,在Inertsil ODS-3 (2.01mm×150mm,5μm)柱上,四种物质可有效分离。0.1%的乙酸水溶液能够使四种分析物离子化。但对于两种规格的ZORBAX SB-C18 (3.0mm×100mm,3.5um和2.1mm×150mm,5μm)均不能使a,β-群勃龙完全分离。

  

2)监测离子的确定

  

按照质谱测定的一-般要求,先对各化合物进行全扫描,随后,对各个化合物确定监测离子,采用选择离子模式以提高检测灵敏度。监测离子的确定是按每种化合物的质谱图和结构特性选取的,具体如图8-17。

  

  

图8-17 四种分析物的全扫描图及监测离子确定示意图
(a)19-乙烯去甲舉酮;(b)epi-19-乙烯去甲睾酮;(c)β-群勃龙;(d)a-群勃龙