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甾类同化激素类药物残留分析技术测定方法(六)

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(7)组学技术

  

为了能够高效地追踪ASs滥用情况,有必要开发新的筛选技术进行非法药物筛查。基于转录组学、蛋白质组学、代谢组学等“omic”技术,可以通过间接检测其生理作用的方法来发现蛋白同化激素滥用。

  

Riedmaier等介绍了应用这些组学技术寻找ASs生物标志物(biomarker)及检测其残留的潜力。该研究组通过鉴定牛血细胞中潜在的基因表达生物标志物,监管ASs使用。采用实时定量反转录聚合酶联反应(qRT-PCR)定量mRNA基因表达改变,而血液细胞是寻找生物标志物的理想材料。据报道,ASs可影响不同血细胞的mRNA基因表达。试验选择18头小母牛,平均分成两组,每组9头。一组为空白对照组,另一组给予醋酸群勃龙和雌二醇复方制剂,连续给药39天。采取3个点血样检测其mRNA表达情况,通过生物标志物图谱筛选候选基因。结果显示,醋酸群勃龙和雌二醇能够显著影响甾体类受体(ER-a和GR-a)、细胞凋亡调控元件Fas、炎性白细胞介素(IL-1a、IL-1β、IL-6)、MHCII、CK、MTPN、RBM5和β-肌动蛋白mRNA基因的表达。通过主成分分析(PCA)显示这些基因是血液中醋酸群勃龙和雌二醇联合使用的潜在标志物。

  

2011年,Anizan等采用甾体类靶向II相代谢物分析,调查分析了动物繁殖过程中天然甾体类固醇激素滥用情况。研究采用给动物外源给药雄烯二酮,寻找潜在的生物标志物,监测甾体类固醇激素在动物体内的残留状况。该研究首次建立了样品制备方法,尿液需先冻干,然后加入纯水溶解,经乙酸乙酯LLE提取,SAX固相萃取柱净化,用水和甲醇-水(25+75,v/v)进行淋洗,用0.2%甲酸甲醇和10%氨化甲醇分别进行洗脱,氮气吹干后,甲醇-水(20+80,v/v)复溶,UPLC-MS/MS测定,结果筛选到葡萄糖醛酸本胆烷醇酮、硫酸表雄酮等代谢产物。Regal等通过HPLC-线性离子阱静电场轨道阱组合式高分辨质谱(LTQ-Orbitrap)来获取代谢物组学数据。血清样品从饲养的奶牛中收集,或者从畜牧饲养不使用性激素(雌二醇-17 β或其酯苯甲酸雌二醇和孕激素)的奶牛中收集。经过适当的数据处理和多变量统计分析(OPLS-DA),有可能突出重要的血清代谢修饰,从而管理雌二醇和孕激素的使用。这些差异被用来建立预测模型,去监控管理这些激素在牛中的非法使用。雌激素和孕激素的潜在生物标志物被指出,但还需要结构解释和说明。

  

基于ASs引起的生理学变化,采用组学技术开发新的筛选方法,并用于检测其残留含量,这项技术将极具前景。一些非常灵敏的方法,如定量RT-PCR、质谱,能够定量基因、蛋白表达或代谢物的细微变化,在生物信息学统计工具的帮助下,可以从实验数据中获取有价值的信息。总之,利用组学技术发现新的物质、监测畜牧业药物滥用,将是未来的挑战。

  

 

  

 

  

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