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甾类同化激素类药物残留分析技术测定方法(三)

[db:作者] / 2022-12-13 00:00

(4)液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)

  

针对ASs的残留分析,GC技术需要进行衍生化,样品的前处理相对比较麻烦;而随着LC-MS技术的发展,越来越多的研究人员将这一技术应用到ASs的残留分析中,样品一般不需要衍生化,而且可以对待测物进行定性和定量分析。LC-MS既可以采用电喷雾电离(ESI),也可以采用大气压化学电离(APCI),已逐渐成为分析ASs残留的主要手段。

  

1)电喷雾电离(ESI)

  

黄士新等用液相色谱-单四极质谱(LC-MS)法分析了猪尿中的丙酸睾酮。色谱柱为Waters Sunfire TM C18柱,流动相为乙腈-0.2%甲酸(81+19,v/v),ESI电离,正离子扫描,SIM模式定量检测。该方法在1~100μgL的浓度水平上,平均回收率为70.13%~83.33%,LOD为1.0μg/L。

  

黄冬梅等建立了水产品中苯丙酸诺龙和诺龙残留量的LC-MS/MS检测方法。色谱柱为CAPCELL PAK C18柱,流动相为0.1%甲酸溶液和0.1%甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.25mL/min,ESI正离子模式电离,MRM扫描。在0.005~0.25μg/mL范围内线性关系良好;在不同浓度添加水平下,两种激素的回收率分别为84.2%~91.3%、76.8%~98.6%,RSD分别为6.8%~13.6%、3.3%~11.3%;LOD均为5.0μg/kg。徐锦忠等建立了鸡肉和鸡蛋中合成类固醇类激素睾酮、甲基睾酮、群勃龙、去氢睾酮、诺龙、美睾酮、康力龙、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的LC-MS/MS多残留检测方法。用C18色谱柱分离,以甲醇和0.1%甲酸水溶液作为流动相,梯度洗脱,流速0.25mL/min,ESI电离,在SRM模式下定性及定量分析。方法的LOQ为0.5μg/kg,平均回收率为73.4%~108.9%,RSD为3.4%~13.4%。陈晓红等建立了牛奶中21-羟基孕酮、17-羟基孕酮、炔孕酮、甲羟孕酮、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮、醋酸甲羟孕酮和孕酮等8种孕激素残留的UPLC-MS/MS检测方法。色谱柱为Shim-packXR-ODSII柱,流动相为0.1%甲酸(含5mmoL/L乙酸铵)和90%乙腈溶液,梯度洗脱,流速0.25mL/min,ESI电离,正离子扫描,MRM检测。在0.5~50.0μg/kg范围内具有良好的线性,相关系数大于0.999,LOQ在0.1~0.5μg/kg之间,添加回收率为73.0%~97.5%。Regal等建立了牛血清中雌激素(苯甲酸雌二醇)的LC-MS/MS检测方法。样品经1.5moL/L羟胺溶液(pH10)羟胺衍生化后,用LC-MS/MS分析。HPLC分离柱为Synergi 2.5 um Fusion-RP 100A(100mm×2mm)柱,流动相为水和甲醇(均含0.1%甲酸),梯度洗脱,流速1.0mL/min,采用ESI、正离子扫描,MRM检测。方法CCa为6.00~19.46ng/L,CCβ为11.84~33.02ng/L。Nielen等利用LC-MS/MS法分析牛毛发中的睾酮含量。色谱柱为Waters Symmetry C8柱,流动相为乙腈-水-甲酸(80+20+2,v/v)和乙腈-甲酸(100+2,v/v),梯度洗脱,流速0.3mL/min,采用ESI、正离子扫描,MRM模式定量检测。该方法的LOD可达到2~5ng/g,回收率在97%~105%之间。
张鸿伟等建立了同时检测肌肉中16种ASs的LC-Q/Trap-MS方法。采用CAPCELL PAK C18 MG II柱(150mm×2.0mm,5.0μm)分离,0.1%甲酸-乙腈溶液和0.1%甲酸-5mmoL/L甲酸铵为流动相,梯度洗脱,流速为0.4mL/min,采用ESI电离,正离子模式,预设定MRM-信息依赖性采集(IDA)-增强子离子扫描(EPI)模式检测,在线EPI谱库确证,内标法定量。16种ASs线性关系良好(r≥0.999),LOQ为0.029~0.36μg/kg,3个添加水平(0.5μg/kg、2.0μg/kg和20μg/kg)下的回收率为89.9%~118%,RSD为6.3%~16.2%。

  

2)大气压化学电离(APCI)

  

Kaklamanos等建立了检测肌肉中20种ASs的LC-MS/MS方法。样品经水解、叔丁基甲醚提取,正己烷LLP净化,HLB和氨基SPE柱净化后,用LC-MS/MS检测。色谱柱为ODS C18柱(150mm×4.6mm,5um),流动相为水和甲醇,梯度洗脱,流速为0.7mL/min。APCI电离源进行正负离子扫描,MRM模式定量。20种ASs的CCa为0.03~0.14μg/kg,CCβ为0.05~0.24μg/kg,回收率为78.8%~119.4%,RSD为1.9%~14.1%。Vanhaecke等建立了牛肉中34种ASs(10种雌激素、14种雄激素和10种孕激素)残留的UPLC-MS/MS检测方法。用Hypersil色谱柱(100mm×2.1mm,1.9μm)分离,流动相为甲醇和水,梯度洗脱,流速0.3mL/min,APCI源在正负离子模式下采集数据,MRM检测。方法的CCa为0.04~0.88μg/kg,CCβ为0.12~1.9μg/kg,日内与日间CV均低于20%,线性关系良好(r>0.99)。Schmidt等采用LC-MS/MS检测牛肉中ASs(17β-TRE,17β-BOL,17a-MTS,STA等),色谱柱为LunaC18(150mm×2mm,5um),流动相为乙腈-水(35+65,v/v)和乙腈,柱温为40℃,梯度洗脱,流速为0.5mL/min,APCI正离子,MRM模式检测。方法的CCa为0.15~0.79μg/kg,CCβ为0.19~1.10μg/kg,回收率为95%~104%,RSD为10.7%~19.5%。

  

动物源基质中ASs的部分HPLC或LC-MS残留检测方法见表8-6。

  

表8-6 动物源基质中ASs的部分HPLC和LC-MS残留检测方法

  

  


  

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