全国服务热线:185-0176-3637
产品分类导航:
当前位置: 主页 > 企业动态 > 技术资料

大环内酯类和林可胺类药物残留测定方法——高效液相色谱法

[db:作者] / 2022-12-12 00:00

(5)高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)

  

HPLC可分析沸点在500℃以上、大分子、强极性和热稳定性差的化合物,在兽药残留分析中得以广泛应用。MALs和林可胺类药物常用的检测器有紫外检测器(ultravioletdetector,UVD)和二极管阵列检测器(diode-arraydetector,DAD;photo-diodearraydetector,PDA),也有采用电化学检测:器(electrochemicaldetector,ECD)和荧光检测器(fluorescencedetector,FLD)的报道。

  

1)UVD、DAD/PDA检测

  

Prats等建立了不同动物组织中的泰乐菌素残留量的HPLC法。该方法应用氯仿或乙酸乙酯在碱性的条件下提取肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中的泰乐菌素,使用C18反相色谱柱进行分离,乙腈-水(含0.04mol/L的磷酸氢二钠,pH2.4)为流动相,最后用UVD进行检测。在50~500μg/kg的添加浓度范围内线性良好,LOQ可达到50ppb。孔科等将肉鸡中的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织制备匀浆后,用乙腈、石油醚和二氯甲烷液液分配净化泰乐菌素,浓缩后用乙腈定容,以乙腈-甲醇-0.005mol/L磷酸二氢铵溶液(60+30+10,v/v)为流动相,HPLC分离,UVD进行检测。样品前处理最终溶液中的泰乐菌素LOD为0.05mg/L,在肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中的LOD均为0.10mg/L,标准曲线的线性范围为0.10~6.40mg/L。张永创建立了猪肉中替米考星残留量的检测方法。以乙腈、水、四氢呋喃为流动相,HPLC-DAD在波长290nm检测,进样量为100μL。方法LOD为0.01ug/g,LOQ为0.02ug/g。刘晔等测定猪肝中的MALs,样品经甲醇提取后,用scx固相萃取柱进行净化,再以0.025mol/L磷酸缓冲液-乙腈(pH2.5)为流动相,在C18分离柱上梯度洗脱,HPLC-DAD检测,方法LOD为0.01~0.037μg/mL,在0.2~20μg/mL范围内峰面积与质量浓度成良好线性关系,相关系数大于0.998。王斌、李存、王雪敏等44461分别建立了动物(牛、猪、鸡)肺脏、猪组织、羊组织中替米考星残留量的HPLC检测方法。样品用乙腈提取,Ci8固相萃取柱净化,UVD在290nm波长测定。方法LOD为0.01mg/kg,LOQ为0.04mg/kg;在0.04mg/kg、0.1mg/kg、1.0mg/kg、10.0mg/kg;添加水平,方法平均回收率在76.8%~94.1%之间,CV在2.7%~8.6%之间。杨方等利用HPLC法同时检测水产品中螺旋霉素和泰乐菌素药物残留。以乙腈和pH2.5磷酸缓冲溶液的混合液作流动相,在MeckPurospherSTAR RP18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱上梯度洗脱、分离,在232nm、287nm分别对螺旋霉素及泰乐菌素进行紫外检测。方法平均回收率为82.2%~89.0%,RSD为6.24%~9.83%。刘永涛、苏秀华等148.49)建立了检测水产品肌肉组织中螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素、北里霉素的UPLC检测方法。以乙腈-25mmol/L磷酸二氢铵(pH2.5,含10%乙腈)为流动相,ACQUITYUPLCBEH C18色谱柱分离,UVD(232nm-螺旋霉素,287nm-泰乐菌素)测定。方法平均回收率为70%~102%,RSD为2.9%~11.2%,螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素和北里霉素的LOD分别为25μg/kg、25ug/kg、50ug/kg、75ug/kg。

  

吴宁鹏等建立了牛奶中替米考星残留量的检测方法。样品经乙腈提取,C18柱净化处理,290nm波长下进行HPLC测定。在添加浓度0.025μg/mL、0.05ug/mL、0.10μg/mL水平,方法的平均回收率在72.1%~85.8%之间,日内CV在7.0%~10.7%之间,日间CV在3.5%~5.4%之间,LOD为0.005μg/mL。Garcia-Mayor等建立了羊奶中MALs残留的HPLC-DAD检测方法。样品经氢氧化钠和乙酸乙酯去除蛋白后,用碱水解除脂,HPLC-DAD测定。方法的回收率为55%~77%,RSD为1%~6.5%。王海涛等建立了牛奶中替米考星、泰乐菌素和螺旋霉素残留量的HPLC同时检测方法。以甲醇为提取液,SCX固相萃取柱净化,0.05moL/L磷酸二氢钠溶液-乙腈为流动相,在ORBAXEclipseXDB C18 (5um,150mm×4.6mm id)反相色谱柱.上进行分离,梯度洗脱,流速1mL/min,用DAD检测。替米考星、泰乐菌索和螺旋霉素的LOD分别为30μg/kg、20μg/kg、40μg/kg,线性范围为20~800ug/kg,平均回收率为88.8%~99.4%,RSD为2.2%~8.9%。

  

赵明建立了蜂蜜中林可霉素残留的HPLC检测方法。样品经提取、净化、反相HPLC分离后,用DAD进行检测。流动相为硼砂缓冲液(pH5.0)-甲醇-乙腈(70+26+4,v/v),流速为1.0mL/min,进样量为20uL,检测波长为204nm。在1.0~20μg/mL范围内,线性关系良好,方法LOD为75ng/g,平均回收率为93.02%,日内CV小于1.58%,日间CV小于1.49%。

  

2)ECD检测

  

Hanada等建立了鼠肝脏中红霉素检测的HPLC-ECD检测方法。氧化红霉素的检测池电势为+1100mV,线性范围为0.5~100.0μg/g,而后应用于临床静脉给药后的浓度测定,完全符合红霉素在小动物药动学研究中的特点,因此该方法是可靠的。Luo等建立了反相HPLC用于鱼组织中林可霉素残留的检测方法。组织样品用磷酸二氢钾缓冲液(pH4.5)进行提取,C18柱净化,50%乙腈进行洗脱,再使用乙酸乙酯进行提取,最后用离子对HPLC-ECD检测。鱼肉的LOD可以达到7ng/g,LOQ可以达到17ng/g;鱼皮的LOD可以达到12ng/g,LOQ可以达到24ng/g。

  

3)FLD检测

  

于慧娟等采用HPLC-FLD技术建立了对虾中红霉素残留量的测定方法。以乙腈为提取溶剂,40mg/mL的NaCl水溶液溶解残渣,正己烷去脂、二氯甲烷反萃取,再向乙腈溶液中加入100uL 0.1moL的KH2PO4(pH7.5)和100uL 2.5mg/mL的衍生试剂(FMOC-CL),于40℃衍生化反应1h,HPLC-FLD测定,激发波长255nm,发射波长315nm。方法LOD为150ug/kg,回收率在75%以上。汪金菊建立了鸡体内阿奇霉素及消除规律研究的HPLC-FLD方法。试验样品(血浆、肌肉、肝脏)经过氢氧化钠碱化后,用正已烷提取净化,吸取适量有机层45℃氮气吹干,再加入衍生试剂9-芴基氯甲酸酯和硼酸盐缓冲液置于50℃水浴锅中衍生40min,最后加入甘氨酸作为终止液,上机检测。试验采用AgilentC18柱(4.6mm×250mm)作为分离色谱柱,选择0.05mol/L磷酸盐缓冲液(含0.2%三乙胺)-乙腈(29+71,v/v,pH5.8)混合液为流动相,激发波长为265nm,发射波长为315nm,流速1.2mL/min,柱温35℃,进样量为20uL。测得血浆中阿奇霉素LOD为0.02μg/mL,肌肉和肝脏为0.03ug/g,LOQ三者均为0.04μg/mL,标准曲线的线性范围为0.04~5μg/mL。