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液相色谱-串联质谱法测定牛奶和奶粉中4种头孢菌素的残留量

[db:作者] / 2022-12-09 00:00

5.2.7.1 适用范围

  

牛奶和奶粉中头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留量的液相色谱-串联质谱测定。牛奶的方法检出限:头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟为4.0μg/kg;奶粉的方法检出限为:头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟为32μg/kg。

  

5.2.7.2 方法原理

  

牛奶和奶粉中头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟残留,用乙腈、磷酸盐缓冲溶液提取,固相萃取柱净化,液相色谱-串联质谱仪测定,外标法定量。

  

5.2.7.3 试剂和材料

  

甲醇、乙腈:色谱纯;磷酸二氢钠(NaH2PO4)、氢氧化钠、乙酸、正已烷:优级纯。

  

乙腈-水溶液(3+1,v/v):量取60mL乙腈和20mL水充分混合。乙腈饱和的正己烷:取100mL正已烷和50mL乙腈于250mL分液漏斗中,振摇1min,静置分层后,弃掉乙腈。5mol/L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠,用水溶解,定容至100mL。0.10mol/L磷酸二氢钠缓冲溶液:称取12.0g磷酸二氢钠,用水溶解,定容至1000mL,然后用氢氧化钠溶液调节至pH8.5。

  

头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟标准物质纯度≥99%。

  

1.0mg/mL四种头孢菌素标准储备溶液:准确称取适量的每种标准物质,分别用水配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液。储备液贮存在-18℃冰柜中。

  

四种头孢菌素标准混合工作溶液:根据需要吸取适量的每种头孢菌素标准储备溶液,用水制成适当浓度的混合标准工作溶液。

  

OasisHLB固相萃取柱或相当者:500mg,6mL。使用前依次用5mL甲醇、5mL水和10mL磷酸二氢钠缓冲溶液预处理,保持柱体湿润。

  

5.2.7.4仪器和设备

  

液相色谱-串联四极杆质谱仪,配有电喷雾离子源;分析天平:感量0.1mg、0.01g;固相萃取真空装置;贮液器:50mL;微量注射器:25μL,100μL;均质器;高速冷冻离心机:带有50mL具塞离心管,转速达到10000r/min以上;刻度样品管:5mL,精度为0.1mL;旋转浓缩仪;氮气浓缩仪。

  

5.2.7.5样品前处理

  

(1)试样制备

  

从全部样品中取出有代表性样品约1kg,充分混匀,均分成两份,分别装入洁净容器内。密封后作为试样,标明标记。在抽样和制样的操作过程中,应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。将试样于-18℃保存。

  

(2)试样溶液的提取

  

a.牛奶:称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中,加入20mL乙腈,使用均质器均质1min,提取液使用高速冷冻离心机在10℃10000r/min离心10min,把上层提取液移至另一离心管中。用15mL乙腈-水溶液重复提取一次,合并两次的提取液,并加入10mL乙腈饱和的正己烷,振荡1min,弃掉正己烷。把提取液移至100mL鸡心瓶中,在40℃用旋转浓缩仪旋转蒸发除去乙腈。

  

b.奶粉:称取0.5g试样(精确到0.01g)置于50mL离心管中,加入4.0mL水,使奶粉充分溶解,加入20mL乙腈,使用均质器均质1min,提取液使用高速冷冻离心机在10℃ 10000r/min离心10min,把上层提取液移至另一离心管中。用15mL乙腈水溶液重复提取一一次,合并两次的提取液,并加入10mL乙腈饱和的正己烷,振荡1min,弃掉正己烷。把提取液移至100mL鸡心瓶中,在40℃用旋转浓缩仪旋转蒸发除去乙腈。

  

(3)试样溶液的净化

  

向已除去乙腈的样品溶液中加入20mL磷酸二氢钠缓冲溶液,然后用氢氧化钠溶液调节至pH=8.5。把样品提取液移至下接OasisHLB固相萃取柱的贮液器中,以3mL/min的流速通过固相萃取柱,先用5mL磷酸二氢钠缓冲溶液洗涤鸡心瓶并过柱,再用2mL水洗柱,弃去全部流出液。用2mL乙腈洗脱,收集洗脱液于刻度样品管中,在40℃氮气浓缩仪吹干,用2mL水溶解残渣,摇匀后,过0.2um滤膜,供液相色谱-串联质谱仪测定。

  

(4)空白样品添加标准混合工作溶液的制备

  

a.牛奶分别准确移取适量四种头孢菌素标准混合工作溶液,添加到5.0g样品中,按照上述步骤操作,制得头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟浓度分别为4.0μg/kg、8.0μg/kg、16ug/kg、40μg/kg四个样品添加标准混合工作溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定。

  

b.奶粉分别准确移取适量四种头孢菌素标准混合工作溶液,添加到0.5g样品中,按照上述提取净化步骤操作,制得头孢匹林、头孢氨苄、头孢洛宁、头孢喹肟浓度分别为32ug/kg、64ug/kg、128μg/kg、320μg/kg四个样品添加标准混合工作溶液,供液相色谱-串联质谱仪测定。