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蜂王浆中18种磺胺残留量的测定液相色谱-串联质谱法(二)

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

2.2.2.6测定

  

(1)液相色谱条件

  

色谱柱:Atlantis C18,3um,150mm×2.1mm(内径)或相当者;流动相:A为乙腈,B为0.1%甲酸水溶液,C为甲醇。梯度洗脱条件见表2-5;流速:0.2mL/min;柱温:35℃;进样量:20μL。

  

(2)质谱条件

  

离子源:电喷雾离子源:扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;电喷雾电压:5500V;雾化气压力:0.076MPa;气帘气压力:0.069MPa辅助气流速:6L/min:离子源温度:350℃:定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2-6。

  

(3)液相色谱-串联质谱测定

  

用基质标准工作溶液分别进样,以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标,以各标准工作溶液浓度与内标溶液浓度的比值为横坐标,绘制标准工作曲线,用标准工作曲线对样品进行定量,样品溶液中18种磺胺的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下,18种磺胺的保留时间见表2-6。18种磺胺的标准多反应监测(MRM)色谱图见图2-1。

  

2.2.2.7分析条件的选择

  

(1)样品提取液的选择

  

分别使用三个不同溶液作为蜂王浆样品提取液,在同一添加水平,相同实验条件下对蜂王浆样品进行回收率实验,实验数据见表2-10

  

表2-10 不同提取液回收率的比较(%)

  

  

从表2-10中数据可以看出,当用0.1mol/L盐酸作为提取液时,经过内标校正回收率在60.0%~369%之间,特别是磺胺吡啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺喹噁啉、磺胺苯酰和磺胺氯吡嗪的回收率均超过了150%。当用0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液时,经过内标校正回收率在34.7%~135.0%,特别是磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺喹噁啉和磺胺氯吡嗪的回收率均低于70%。当用水作为提取液时,经过内标校正,18种磺胺的回收率在78.8%~118.0%之间,整体上要好于0.1 mol/L盐酸和0.2 mol/L磷酸盐缓冲溶液,因此在本方法中选择水作为蜂王浆样品提取液。

  

(2)提取液pH的确定

  

对于建立兽药多残留前方法来说,选择合适的pH样品提取液是至关重要的,因为不同pH的目标物质过柱时要求其样液的pH也不同,为了找出磺胺类药物过Oasis MCX柱最佳pH,蜂王浆样品经三氯乙酸沉淀蛋白后,提取液的pH即为1.0,将提取液分别调至pH=1.0、pH=2.0、pH=3.0、pH=4.0四个不同的pH,在其他条件相同的情况下,进行回收率实验,实验数据列于表2-11。从表2-11可以看出,磺胺甲噻二唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶随着pH的增大,回收率越来越低,当pH=3.0时,其回收率低于70%,而在pH=1.0时,回收率均在80%以上,相对比较稳定,整体比较要好于其他三个水平。因此,在本方法中确定pH=1.0为样液过Oasis MCX柱时的最佳pH。

  

表2-11 不同pH提取液回收率的比较(%)