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磺胺类药物残留测定方法(三)

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

3)质谱检测器(MSD)

  

随着液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的发展,特别是色谱-质谱接口技术的完善和超高效液相色谱-串联质谱技术(UPLC-MS/MS)的出现,LC-MS已经大量应用于SAs的残留分析,成为目前SAs最灵敏的分析检测手段。在LC-MS分析中,一般采用尺寸较小的柱子,以乙酸或其他有机酸调节流动相的pH以便于汽化。SAs测定通常采用电喷雾(ESl)接口,正离子扫描。

  

Shao等建立了猪组织(肉、肝、肾)中17种SAs的LC-MS/MS检测方法。样品用无水硫酸钠除水,乙腈提取,正己烷除脂,Sep-Pak硅胶柱净化后,LC-MS/MS检测,甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,ESr、MRM模式监测。方法回收率在52%~120%之间,LOD在0.01~1.0ug/kg之间。金明等建立了牛肝中7种SAs残留量的UPLC-MS/MS测定方法。样品经乙庸提取后,过MCX阳离子交换SPE柱净化,利用UPLC-MS/MS检测。色谱柱为ACQITY UPLCTMC18柱,进样体积5uL,流动相为0.2%甲酸甲醇溶液-0.2%甲酸溶液,梯度洗脱,ESI、MRM模式监测。该方法LOD为0.02ug/g;加标回收率为70.6%~112.5%,RSD为2.6%~14.3%。我国国家标准GB/T20759-2006规定了畜禽肉中16种SAs残留的检测方法。用乙腈提取,正己烷脱脂后,LC-MS/MS检测。色谱柱为Lichrospher 100RP-18(5um,250mm×4.6mmi.d.),流动相为乙腈-0.01mol/L乙酸铵溶液(12+88,v/v),流速0.8mL/min,柱温35℃,进样量40uL,分流比1:3,ESI+、MRM模式监测,外标法定量。方法LOQ为2.5~40.0ug/kg:添加水平2.5~600.0ug/kg范围,回收率在65.9%~110.1%之间,RSD在2.63%~12.67%之间。

  

刘正才等建立了快速测定级鱼中11种SAs残留量的UPLC-MS/MS方法。采用乙腈-二氯甲烷混合溶剂提取,SPE柱净化后,以UPLC-MS/MS测定。色谱柱为Acquity UPLCBEHC18柱,流动相为5mmol/L乙酸铵-0.2%(体积分数)甲酸和甲醇,梯度洗脱,流速0.2mL/min,进样量10uL,ESl+、MRM模式分析,外标法定量。该方法的线性范围为0~50ug/kg,相关系数均大于0.990;在2.0ug/kg、5.0 ug/kg、10 ug/kg、20 ug/kg添加水平范围内的回收率为63%~95%,RSD为1.0%~10.0%;LOQ均小于6ug/kg。我国国家标准GB/T22951-2008规定了豚鱼、鳗鱼中18种SAs残留量的LC-MS/MS测定方法。用乙腈提取,用正已烷脱脂后,供LC-MS/MS测定。色谱柱为Atlantis Cl8(3um,150mm×2.1mm),流动相为乙腈-0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱,流速0.2mL/min,柱温35C,进样量20uL,ESI+、MRM模式监测,内标法定量。方法LOQ均为5.0ug/kg;在添加水平5~50.0ug/kg范围内,回收率在65.9%~110.1%之间,RSD在2.63%~12.67%之间。

  

郭伟等应用UPLC-MS/MS分析牛乳中24种SAs残留。样品经改良的QuEChERS技术提取和净化,采用BEH C18色谱柱分离,0.25%乙酸和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,UPLC-MS/MS在ESI正离子、MRM模式下检测。24种药物在5~100ug/kg浓度范围内线性良好,相关系数r均大于0.99;在5~50ug/kg添加浓度水平,平均回收率在64.2%~110.9%之间,RSD为3.2%~13.1%;方法LOD为0.21~1.62ug/kg。余永新等利用UPLC-MS/MS联用技术,建立了一种能在10min内快速分离和测定牛奶中24种SAs残留的方法。样品经匀浆、超声、乙腈重复提取、氮吹浓缩,流动相溶解,饱和正己烷脱脂。采用ACQUITY UPLCTMBEHC18柱分离,以乙腈-0.2%乙酸为流动相,梯度洗脱,目标分析物使用UPLC-MS/MS进行测定。以保留时间和离子对进行定性和定量,在ESI+和MRM监测模式下进行样品分析。该方法LOD为0.04~1.35ug/kg,在1~200ug/L范围内线性关系良好,回收率为61%~117%,RSD为2.92%~18.98%。我国国家标准GB/T22966-2008规定了牛奶和奶粉中16种SAs残留量的LC-MS/MS测定方法。用高氯酸溶液提取,Oasis HLB固相萃取柱净化,LC-MS/MS测定。色谱柱为C18(5um,150mm×2.1mm)柱,柱温30℃,进样量10uL,流动相为0.1%乙酸-甲醇,梯度洗脱,流速0.2mL/min,ESl+、MRM模式扫描。外标法定量。方法LOQ为1.0~4.0ug/kg;牛奶回收率在72.2%~94.9%之间,RSD在3.12%~8.45%之间:奶粉回收率在79.1%~95.9%之间,RSD在2.35%~7.89%之间。

  

Thompson建立了蜂蜜中7种SAs的LC-MS/MS分析方法。样品经酸水解后,过滤,直接进LC-MS/MS检测。采用梯度洗脱程序,在线自动净化,通过六通阀切换将净化后的分析物注入质谱系统。该方法回收率为93.3%~101.9%,LOD为0.5~2ug/kg。我国国家标准GB/T 18932.17-2003规定了蜂蜜中16种SAs的残留检测方法。用pH2磷酸溶液提取,经阳离子交换柱和Oasis HLB固相萃取柱净化后,用LC-MS/MS检测。色谱柱为Lichrospher*100RP-18(5um,250mm×4.6mmi.d.),流动相为乙腈-0.01mol/L 乙酸铵溶液(12+88,v/v),流速0.8mL/min,柱温35℃,进样量40uL,分流比1:3,ESI+、MRM模式监测。在添加水平1.0~300.0ug/kg内,其回收率在70%~110%之间,RSD在2.65%~11.52%之间:LOD为为1.0~12.0ug/kg。我国国家标准GB/T22947-2008/9引规定了蜂王浆中18种SAs残留量的LC-MS/MS测定方法。用去离子水提取,三氯乙酸沉淀蛋白,Oasis MCX离子交换柱净化后,LC-MS/MS测定。色谱柱为Atlantis C18(3um,150mm×2.1mm),流动相为乙腈-0.1%甲酸-甲醇,梯度洗脱,流速0.2mL/min,柱温35℃,进样量20uL,ESI+、MRM模式监测,内标法定量。方法LOQ均为5.0ug/kg;添加水平5.0~50.0ug/kg 范围,回收率为74.9%~123.0%,RSD为2.12%~8.91%。

  

刘佳佳等利用LC-MS/MS联用技术,建立了一种在28min内快速分离和测定鸡肉、猪肉、牛肉、羊肉、蜂蜜、牛奶中24种SAs残留的方法。样品用乙腈和乙酸乙酯提取,经正己烷LLP净化后,进LC-MS/MS分析。采用EclipseXDB-C18色谱柱,柱温30℃,样品温度25℃,进样体积5uL,流动相为乙腈和0.2%乙酸溶液,流速0.20mL/min,梯度洗脱,ESI正离子扫描,MRM模式检测。该方法LOD为0.27~7.45ug/kg,LOQ为0.957~9.89ug/kg;在5~300ug/L范围内线性关系良好,在10ug/kg、20ug/kg、50ug/kg三个添加浓度上的回收率为60.8%~122.9%,RSD为0.01%~19%。

  

Huang等建立了一种液相色谱-四极杆串联线性离子阱质谱(LC-QqLIT)方法,分析动物组织中的SAs。样品处理采用快速单管提取/多组分分配吸附净化技术(SEP/MAC),LC-QqLIT在正离子化模式下进行66Da(NLS)中性丢失扫描及m/z108母离子扫描(PreS),获得SAs全面的质子化分子离子峰,其中包括N-乙酰基和羟胺代谢产物以及其可能的二聚体。另外,母离子扫描引起的结果自动提高了子离子谱图的采集,并且能够在一次分析中同时筛查、描绘和确认大量SAs。该方法的准确度(67%~116%)、精密度(RSD<25%)和灵敏度(LOQ≤7.5ng/g)能满足SAs的检测标准。通过将基质独立SEP/MAC方法和具有多参数匹配算法的低分辨LC-QqLIT结合,可以作为一个有价值的半定向筛查方法,用于快速筛查和对实际样品进行可靠的定量/确证分析。Heller等还建立了同时检测鸡蛋中15种SAs的LC-MSn分析方法。样品用乙腈提取,经C18 SPE柱净化后,用LC-MS2测定。该方法的确证浓度可以达到5~10ng/g,定量范围在50~200ppb之间。

  

液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(LC-qTOF-MS)也开始用于SAs的筛选检测。Turmipseed 等开发了LC-qTOF-MS筛查牛奶中多种SAs的方法。样品用乙腈提取,分子量截留过滤器净化后,用LC-qTOF-MS检测:采集TOF的MSl数据,通过保留时间和准确质量数筛查,准确度可以达到97%,在关注水平的线性和回收率都可以接受。另外,[M+H]+离子的二级质谱数据被用于确证。Peters 等采用LC-qTOF-MS建立了鸡蛋、鱼、肉中100种兽药(包括SAs)的筛查方法。该方法线性良好,回归系数平方大于0.99;在4~400ug/kg浓度范围,平均质量误差为3ppm,平均SigmaFit值为0.04;方法回收率在70%~100%之间,重复性为8%~15%,重现性为15%~20%:灵敏度满足限量要求。