全国服务热线:185-0176-3637
产品分类导航:
当前位置: 主页 > 企业动态 > 技术资料

磺胺类药物残留测定方法(一)

[db:作者] / 2022-12-08 00:00

随着兽药残留分析技术的发展,仪器分析方法在残留检测领域的地位越来越受到重视,动物源基质中SAs残留分析常用仪器分析技术见表2-4。LC-MS/MS具有高效快速、灵敏高、重复性好及提供确证信息等优点,已经逐渐成为SAs残留分析中最常用的方法:而免疫分析技术也已成为SAs残留分析的研究热点,但如何提高免疫分析法的灵敏度,避免假阳性结果的出现,还有待进一步研究。

  

(1)高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)

  

HPLC是SAs残留分析的国际公认方法,但也有一定的局限性,主要表现在样品前处理步骤较多,分析时间长,不利于快速筛选,特别是在多残留分析时,很难实现色谱上的完全分离,而梯度洗脱的运用,可以一次分析更多的药物种类。随着超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)的发展,它同时实现了高分离度、高灵敏度和高分析速度,目前已经大量应用于SAs的残留分析。SAs是酸碱两性药物,其保留能力与流动相的pH、柱填料类型等有关。流动相一般为乙腈、甲醇、水,并常加入甲酸、乙酸、磷酸、磷酸盐缓冲液以及醋酸铵等,改善色谱分离,提高灵敏度。常用的色谱柱为Cig柱和苯基柱,通过紫外检测器(ultraviolet detector,UVD)、二极管阵列检测器(diode-array detector,DAD;photo-diode array detector,PDA)、荧光检测器(fluorescence detection,FLD)、质谱检测器(mass spectrometry detector,MSD)、电化学检测器(electrochemical detector,ECD)以及化学发光检测器(chemiluminescent detector,CLD)等进行检测。

  

1)紫外检测器(UVD)和二极管阵列检测器(DAD/PDA)

  

SAs结构中带有苯环,还具有较强的紫外吸收,紫外检测常用的波长范围为260-280nm。

  

万春花等建立了动物组织中的15种SAs的HPLC分析方法。样品用乙腈提取,经正己烷LLP净化和SPE净化后,进HPLC分析。采用C18色谱柱,柱温30℃,以乙腈-0.02%磷酸为流动相,流速1.0mL/min,梯度洗脱,在268nm下测定。方法加标回收率在80.3%~92.3%之间,灵敏度满足残留分析要求。Pecorelli等建立了同时测定动物肌肉中10种SAs的HPLC分析方法。匀浆后的样品用乙酸乙酯提取,阳离子交换SPE柱净化后,用HPLC-DAD在270nm检测。方法按照2002/657/EC对特异性、灵敏度、准确度等进行验证,性能指标满足SAs残留分析的要求。赵海香等以MSPD和HPLC技术为基础,采用低毒的乙酸乙酯为洗脱溶剂,建立了与环境友好的鱼肉组织中8种SAs的多残留快速分析法。采用C18柱分离,柱温30℃,50mmol/L NaH2PO4-乙腈(70+30,v/v)为流动相,流速0.7mL/min,270nm紫外检测。8种SAs被有效分离,在0.01~1.0ug/mL范围内线性相关系数在0.9999以上;添加回收率为76.0%~115.0%,RSD小于6.4%;仪器LOD均为0.01ug/mL,方法LOD为0.02ug/g。

  

Kishida等国建立了鸡血浆中SMM、SDM及其N-乙酰基代谢物的HPLC分析方法。样品用4mol/L硫酸铵溶液均质提取,离心后用HPLC检测。在聚乙二醇反相色谱柱上分离,0.001mol/L乙酸钠为流动相,PDA测定。在0.1ug/mL、0.5ug/mL、1.0ug/mL添加浓度,方法回收率大于78%,RSD小于4%;LOQ优于0.09ug/mL。Jen等建立了猪下水中SAs的残留分析方法。样品用乙酸乙酯提取,HPLV-UVD测定,ODS反相色谱柱分离。在0.05~10ug/mL范围,方法线性良好(r>0.9999),适用于猪下水中SAs的测定。Kishida等采用HPLC-PDA还检测了鸡血浆、肌肉、肝脏和鸡蛋中的SMM、SDM及其NM-羟基乙酰化代谢产物。样品用乙醇在手持式超声波匀浆器中提取,以反相C4柱为分离色谱柱,乙醇-1%乙酸为流动相,梯度洗脱,PDA检测。方法回收率大于90%,RSD小于%,LOQ优于30ng/g。

  

Kishida等国还开发了原料乳中SMM、SDM及其N-乙酰基代谢物的HPLC分析方法。样品用乙醇-乙酸(97+3,v/v)提取,Hisep屏蔽疏水相(SHP)色谱柱分离,pH3.1 0.1%乙酸-乙醇(75+25,v/v)为流动相,PDA测定。在添加浓度25~500ng/mL的回收率均大于81%,RSD小于5%;LOQ优于25ng/mL。Tolika等开发了牛奶中SDZ、STZ、SMTH、SMZ、SMPZ、SMMX、SMXZ、SIX、SDMX、SQX等10种SAs的HPLC-PDA检测方法。用乙酸乙酯、正己烷、异丙醇混合提取,以0.1%甲酸-乙腈-甲醇为流动相,梯度洗脱,在265nm检测。3个添加水平下的回收率在93.9%~115.9%之间,RSD低于8.8%;CCa为101.61~106.84μg/kg,CCβ为105.64~119.01ug/kg。张丽媛等应用以离子液体为基础的均相液液微萃取技术,建立了酸奶样品中SD、SMI、SM2和SMZ的HPLC分析法。通过加盐和调节酸奶样品的pH,将酸奶样品中的蛋白质和脂类除去。用C18色谱柱分离,柱温35℃,流动相为0.1%甲酸乙腈溶液和pH3的0.1%甲酸,梯度洗脱,流速0.5mL/min,进样量20uL,检测波长265nm。SD、SMl、SM2和SMZ的LOD分别为8.17ug/L、7.43ug/L、6.71ug/L、7.51ug/L。应用该方法对4种酸奶样品进行分析,加标回收率在95.78%~104.38%之间,RSD低于5.23%。

  

表2-4动物源基质中常用的SAs残留分析技术