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原料乳及乳制品中三聚氰胺的测定(二)

小编 / 2022-10-18 17:04

  5.操作步骤

  (1)样品提取称取2g(精确至0.01g)试样于50mL具塞塑料离心管中,加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈,超声提取10min,再振荡提取10min后,以不低于4000r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25mL,移取5mL滤液,加入5mL水混匀后作待净化液。


  注:若样品中脂肪含量较高,可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。


  (2)样品净化固相萃取柱中事先加入3mL甲醇和3mL水通过小柱调整,流出液弃去,然后加入稀释后的待净化液,待全部样品经过小柱后,再依次用3mL水和3mL甲醇洗涤固相萃取柱,抽至近干后,向固相萃取柱中加入6mL氨化甲醇溶液洗脱,收集洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于0.4g样品)用1mL流动相定容,旋涡混合1min,过微孔滤膜后,供测定。


  (3)液相色谱仪测定

  ①仪器条件

  色谱柱:C8柱,250mm×4.6mm(i.d.),5um,或相当者;C18柱,250mm×4.6mm(i.d.),5um,或相当者。流动相:C8柱,离子对试剂缓冲液-乙腈(85+15,体积比),混匀;C18柱,离子对试剂缓冲液-乙腈(90+10,体积比),混匀。流速:1.0mL/min;柱温:40℃;测定波长:240nm;进样量:20uL。

  ②标准线性:用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8,2,20,40,80ug/mL的标准工作液,浓度由低到高进样检测,以峰面积-浓度作图,得到标准曲线回归方程。

  ③定量测定:待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围则应稀释后再进样分析。


  6.结果计算

  试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按下式计算获得。

  式中x——试样中三聚氰胺的含量,mg/kg

  A——样液中三聚氰胺的峰面积,cm2

  p——标准溶液中三聚氰胺的浓度,ug/mL

  V——样液最终定容体积,mL

  As——标准溶液中三聚氰胺的峰面积,cm2

  m——试样的质量,g

  f——稀释倍数


  7.要点提示

  (1)固相萃取柱流速不可过快,否则影响净化效果,一般控制在1~2滴/s为宜。

  (2)必要时应添加回收质控样品以监控检测质量,一般控制回收率在80%~120%为宜,阳性样品应使用回收率校正后报告结果。

  (3)C18、C8色谱柱属于反相柱,柱管内充满有机溶剂,检测样品前,应用10倍柱体积的流动相冲洗色谱柱;检测完毕后,使用乙腈-水(20+80)的流动相以1mL/min的流速冲洗色谱柱20~30min,再用10~20倍柱体积的甲醇或乙腈将柱管内的流动相置换出来,使其保存在有机相中以保证其可靠的色谱性能。